Определение группы крови у взрослых и детей: методы. Определение группы крови сыворотками Определение группы крови стандартными сыворотками

Определение группы крови по стандартным сывороткам используется часто (по сравнению с другими методиками). В основе данной техники — содержащиеся в крови агглютинины и агглютиногены в различных комбинациях.

Соединение одноименных агглютиногена и агглютинина сопровождается реакцией агглютинации (однородное пятно распадается на многочисленные мелкие пятна, состоящие из эритроцитов, склеившихся между собой).

Суть метода

При оказании медицинской помощи не всегда удается быстро остановить кровотечение, для переливания требуется определение группы крови, резус-фактора.

Существуют 2 эритроцитных антигена (агглютиногены А и В) и 2 антитела (а и b). Различные комбинации антигенов и антител образуют 4 группы крови.

Данный способ имеет преимущества, т. к. позволяет свести к одному многочисленные измерения.

Методика определения показателей

Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.

Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).

Изготовление сыворотки

Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.

Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.

Манипуляцию повторяют, пока не получат разведение смеси в пропорции 1:256. Другие разведения не используют, чтобы исключить возникновение ошибки.

Для одного исследования группы крови с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:

• I (0) — прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой;
• II (А) — жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета;
• III (В) — бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками;
• IV(АВ) — желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.

На этикетках указаны:

• титр;
• срок годности;
• дата выпуска;
• серийный номер.
• данные об изготовителе.

Проведение исследования

Температура в помещении должна быть в пределах +15…+ 25°С, требуется хорошее освещение.

Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них — контрольный, 2 — для диагностики).

Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:

• если происходит реакция агглютинации — сывороточный тест считается положительным;
• при отсутствии агглютинации тест отрицательный.

Результаты исследования

В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).

Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:

• I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции;
• II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция;
• III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной;
• IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.

Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.

Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.

Вконтакте

В наше время медицина достигла больших высот. Врачи способны проводить долгие операции и спасать людей даже из самых, казалось бы, безвыходных в плане выживания ситуаций. Однако, в таких случаях приходится сталкиваться с проблемой необходимости переливания крови. Долгое время это было мало осуществимо в связи с тем, что пациенты умирали очень быстро. Но данный вопрос был решен открытием понятия групп крови, а точнее обнаружения на эритроцитах антигенов и, в свою очередь, антител в плазме крови.

В начале двадцатого века Австралийский врач, по совместительству ученый К. Ландштейнер открыл наличие в крови антигенов и антител. Антигены находятся на поверхности эритроцитов. Их бывает 2 вида. Для простоты биологи обозначили их как A и B. В свою очередь антитела содержатся в плазме крови и получили названия α и β. Если A соединить с α, а B с β, начнется процесс сворачивания крови. Данная реакция носит название гемагглютинация.

Таким образом из имеющихся наборов антигенов и антител можно составить 4 типа крови, приведенных в таблице ниже:

Важно! В зависимости от того, какой тип донорской крови предоставляется для переливания, кровь пациента либо сворачивается, либо нет. Первый случай грозит летальным исходом.

Сыворотки для проведения реакции

На текущий момент имеется достаточно большое количество способов определения группы крови. Но большая часть из них рассчитана на анализ в крупных лабораториях. Однако, даже если вы находитесь в маленькой деревушке или в месте, где никак не получится обратиться в подобные учреждения, возможность выявления номера группы крови все равно остается.

Определение группы крови осуществляется с применением четырех специальных стандартных сывороток, которые будут изготавливаться из крови человека. Они выпускаются либо во флакончиках, либо в ампулах по 2-5 мл и соответствуют разным группам крови:

1. 0. Выпускается с белой этикеткой и имеет прозрачный цвет.
2. A. Жидкость голубой окраски. На флакон наносятся две синие полосы.
3. B. Жидкость бледно-розового оттенка. На флаконе присутствуют три полосы той же окраски.
4. AB. Жидкость желтого окраса. На флакон нанесены 4 полосы того же цвета.

Важно! На самом деле указанные реагенты при изготовлении не имеют цвета. Они окрашиваются специально, чтобы при использовании их было невозможно перепутать.

Также на этикетки наносятся:

• титр;
• дата производства;
• срок годности;
• данные об изготовителе;
• серийный номер.

Как определяется группа крови

Чтобы определить группу крови, понадобится:

• плоская тарелка с 8 углублениями;
• стеклянные палочки или пипетки - 8 штук;
• 2 набора сывороток разной серии для исключения возможности ошибок;
• обычные или песочные часы.

На плоскую тарелку помещаются сыворотки в 2 ряда, после чего берутся стеклянные палочки. С их помощью в ряды вносится исследуемая кровь. Этими палочками она размешивается, после чего тарелку начинают покачивать. Если повезет, процесс можно отследить за 10-30 секунд, но лучше это делать до 5 минут, чтобы исключить возможность заторможенности реакции. Затем происходит изучение и расшифровка полученных результатов.

Внимание! В первую очередь следует обратить внимание на кружки, в которые была налита сыворотка II и III групп крови. Интерес представляет наличие мелких хлопьев, появляющихся в результате агглютинации - слипания эритроцитов.

1. Если ни во II, ни III хлопьев нет, а также при дополнительной проверке ни в I, ни IV также ничего не свернулось, значит имеется первая группа крови.
2. Если в результате свертывание отмечается везде, кроме сыворотки II группы, значит исследуемая кровь относится ко второй группе.
3. Если свертывание наблюдается во всех образцах, кроме сыворотки III группы, значит исследуемая кровь относится к одноименной группе.
4. Если сворачивание прошло во всех образцах, кроме сыворотки IV группы, значит анализу была подвержена одноименная группа крови.

Важно! Строго говоря, группу крови можно определить, имея сыворотки только 2 и 3 группы крови. Однако, как можно сделать вывод из сути метода, имеется большое влияние человеческого фактора. По этой причине сыворотки I и IV группы крови используются в качестве дополнительной проверки.

После процедуры используемая посуда должна быть хорошо промыта теплой водой и высушена. Затем ее можно использовать для дальнейших исследований.

Неточности результатов и их причины

Иногда бывает так, что сгустки слипшихся эритроцитов видны не очень четко. Во время проверки зачастую может быть добавлен изотонический раствор хлорида натрия. Он позволяет исключить вероятность ложной агглютинации, заставляя рассыпаться обратно хлопья, получившиеся не в результате процесса свертывания.

Важно! Если результат анализа виден не особо четко, его необходимо переделать и воспользоваться микроскопом, чтобы рассмотреть мелкую агглютинацию.

В случае четко выявленного результата можно сразу точно назвать пациенту его группу крови. Иначе следует обратиться к другим методам проведения анализа.

Не стоит забывать и о возможности ошибок, которые обычно происходят по следующим причинам:

• использование просроченной или слабой сыворотки;
• использование слишком большого количества исследуемой крови по отношению к объему сыворотки;
• реакция проводится намного дольше, чем положено нормативами;
• температура окружающей среды не соответствует нормальной, в результате чего происходит холодовая агглютинация эритроцитов.

Дополнительно стоит заметить, что в процессе высыхания по краям смеси сыворотки и исследуемой крови возможно образование зернистых участков, которые не могут служить показателями реакции.

Использование результата на практике

Как уже упоминалось, определение группы крови проводится для исключения летального исхода во время ее переливания. В идеале пациенту, принимающему кровь - реципиенту - необходимо переливать кровь той же группы, что и у него самого. Однако так получается далеко не всегда. Хотя бы потому, что людей с первой группой крови подавляющее количество - 50%. В то же время они являются универсальными донорами, поскольку у них отсутствуют агглютиногены, которые стимулируют процесс свертывания крови.

Внимание! Что касается пациентов с IV группой крови, то их можно назвать универсальными реципиентами, поскольку их организм способен принять кровь любой группы. В то же время их кровь не может быть перелита представителям другой группы.

Для наглядности совместимости доноров и реципиентов приведем таблицу:

Номер группы	Для каких групп становится донором	Для каких групп становится реципиентом
I	I, II, III, IV	I
II	II, IV	I, II
III	III, IV	I, III
IV	IV	I, II, III, IV

В современном мире знание группы крови жизненно необходимо. От этого, с точки зрения врачей, будет зависеть коэффициент выживаемости из пациентов. С точки зрения обычных людей это шанс в экстренной ситуации сохранить свою жизнь. В связи с этим не лишним будет знать свою группу крови и, по возможности, проставлять ее в паспорт либо другие документы, поскольку риск здоровью и жизни может возникнуть в любой момент.

Видео — Определение группы крови

Видео — Определение группы крови и резус-фактора

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями;набор стеклянных палочек;изотонический раствор хлорида натрия;набор гемагглютинирующих сывороток 1,2,3,4 групп двух серий;пипетки;исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.

Определение группы крови по стандартным сывороткам

Группы крови разделяются с учетом наличия в эритроцитах человека антигенов-агглютиногенов А и В и соответственно в сыворотке крови антител-агглютининов a и b. При контакте одноименных агглютиногенов и агглютининов происходит реакция агглютинации (склеивание, «образование песка») эритроцитов с последующим их разрушением (гемолизом). В крови каждого человека могут находится лишь разноименные агглютиноген и агглютинин. По Янскому выделены 4 группы крови; в клинической практике используют понятие «группа крови по системе АВО».

Для определения групп крови применяют стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. В сыворотке имеются агглютинины, являющиеся антителами всех 4 групп крови, а их активность определяется титром.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II(А), III(В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II(А), III(В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп:

Первая группа Вторая группа

Третья группа Четвёртая группа

Понятие о группах крови

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.

Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови - 0 (I)

I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.

Группы крови по системе АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа опреде­ления групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испыту­емой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей использу­ется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных се­рий. Сыворотки для определения групп крови изготав­ливают из донорской крови в специальных лаборато­риях. Хранятся сыворотки в холодильнике при темпе­ратуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то мак­симальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без при­знаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на пре­паратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

Белые фарфоровые или эмалированные тарел­ки или другие пластинки со смачиваемой поверх­ностью, маркированные, согласно группам крови.

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями груп­пы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворот­ку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать оши­бок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в сле­дующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель иссле­дуемой крови величиной примерно с булавочную го­ловку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно переме­шивают между собой стеклянными палочками с за­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: на тарел­ку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каж­дый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачи­вают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не ме­нее 5 минут, так как возможна более поздняя агглю­тинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору­женным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мел­кие зернышки постепенно сливаются в более круп­ные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равно­мерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в каплях с сыво­роткой одной и той же группы должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответству­ющей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сы­воротками.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые по­лучают с помощью гибридомной, биотехнологии.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует спе­цифические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, ха­рактерна для опухолевой клетки и присущей лим­фоциту способностью синтезировать антитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, при­меняемые для определения агглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот­ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Ря­дом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После переме­шивания компонентов наблюдают за реакцией агг­лютинации в течение 2-3 минут. Оценка результа­тов очень проста.

Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выде­лить три основные группы ошибок: ошибки, свя­занные с низким качеством реагентов; техничес­кие ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыво­ротке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной темпера­туре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эрит­роциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подоб­ное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности про­водить при температуре 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаях не­четкого или сомнительногскрезультата следует про­вести повторное определение групп крови при по­мощи стандартных сывороток других серий, а так­же перекрестным способом.

Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками (прямой способ).

Указанные сыворотки выпускаются станциями переливания крови во флаконах или ампулах по 5 мл, подкрашенные в соответствующий группе крови цвет.

На этикетке должны быть указаны:

название учреждения, где изготовлена сыворотка;

групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов;

номер серии;

титр агглютининов в сыворотке;

срок годности;

Для проведения реакции пригодны сыворотки с титром агглютининов не ниже 1:32.

Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре +2-4ºС. Допускается замораживание сыворотки - ее можно использовать после оттаивания. Перед применением необходимо убедиться, что в сыворотке нет хлопьев и осадка, она сохранила соответствующий группе цвет. Перед постановкой реакции сыворотка должна согреться до комнатной температуры (+15-25ºС) в течение 30-40 мин. Тарелка или пластинка, на которой ставится реакция, также должна иметь комнатную температуру.

Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток

Оснащение:

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III) двух серий и сыворотка группы АВо(IV) одной серии.

Изотонический раствор хлорида натрия.

Белые фарфоровые или любые другие пластинки (тарелки) со смачиваемой поверхностью, разделенные на четыре сектора, обозначенные соответственно группам крови.

Маркированные для каждой группы крови и серии сывороток пипетки.

Стеклянные или пластмассовые палочки с округлыми концами для перемешивания крови.

Техника выполнения:

На краю пластинки (тарелки) пишут фамилию и инициалы пациента.

Под соответствующими обозначениями на пластинку (тарелку) наносят по капле (приблизительно 0,1 мл) сывороток групп Оαβ(I), Аβ (II), Вα (III) двух серий. Сыворотку берут из каждого флакона отдельной пипеткой, которая затем остается во флаконе.

Кровь для исследования берут из места укола мякоти концевой фаланги пальца. Можно также использовать цельную венозную кровь или взвесь эритроцитов после сворачивания или центрифугирования крови с Htне менее 30%. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят стеклянной палочкой на пластинку (тарелку) рядом с каплей стандартной сыворотки. Таким образом, соотношение крови и сыворотки получается 1:10.

Стеклянной палочкой перемешивают капли крови и сыворотки до равномерного окрашивания смеси в розовый цвет. Необходимо или каждый раз использовать новую палочку, или после каждого перемешивания промывать палочку в стакане с физиологическим раствором и насухо вытирать чистой марлей или ватой.

После перемешивания пластинку осторожно покачивают в руках до истечения времени постановки реакции. Этим предотвращается неспецифическая агглютинация эритроцитов («ложная агглютинация»).

Результат реакции оценивают через 5 мин. В случае наступления агглютинации с сыворотками всех групп ставится аналогичная реакция с сывороткой четвертой группы, одной серии. Заключение о принадлежности крови к IVгруппе делается при отсутствии агглютинации с сывороткойIVгруппы. При сомнительных результатах реакции по истечении 5 минут в капли, где произошла агглютинация можно добавить по 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и слегка покачать пластинку. «Ложная агглютинация» при этом исчезнет.

Трактовка результатов реакции

Реакция гемагглютинации может быть положительной и отрицательной. При положительной реакции образуются агглютинанты, имеющие вид крупинок или хлопьев, а капля изогемагглютинирующей сыворотки почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции сыворотка продолжает оставаться окрашенной в розовый цвет и в ней не обнаруживается агглютинантов. Результаты реакций с сывороткой одной и той же группы разных серий должны совпадать.

Необходимо указать, что в соответствии с новой «Инструкцией по применению компонентов крови» (2002) в отличие от Инструкции 1998 г в технику прямого способа определения групп крови внесены следующие изменения:

Соотношение крови и сыворотки – 1:10. Ранее – 1:5 – 1:7.

Добавление физиологического раствора производится только по истечении 5 минут, то есть по истечении срока проведения реакции. Ранее изотонический раствор хлорида натрия добавлялся по мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин. от начала реакции.

Прямой способ определения группы крови даже при технически безупречном выполнении предполагает хотя и очень небольшую (доли процента), но достоверную вероятность ошибки. Основными причинами возможных ошибок являются наличие подгрупп и «кровяные химеры». Для ликвидации возможных ошибок результат прямой реакции перепроверяется перекрестным способом.

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия ; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

На белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

С помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

Отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом - обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 0 С.

В основе определения групп крови лежит реакция агглютинации, то есть слипания. Комки образуются, если в пробе имеются одновременно агглютиноген А и агглютинин альфа или агглютиноген В и агглютинин бета или же и то, и то одновременно. Агглютиногены содержатся в эритроцитах, а агглютинины являются компонентами плазмы крови.

В соответствие с этими признаками выделяют четыре группы крови по системе АВ0:
— I (0) – не содержит агглютиногенов, только агглютинины;
— II (A) – агглютинин b, агглютиноген А;
— III (B) – агглютинин a, агглютиноген B;
— IV (AB) – содержит только агглютиногены.

Одним из методов установления группы крови является определение групп крови по стандартным сывороткам . Стандартные сыворотки содержат в себе заведомо известные агглютинины: групп I, II и III. Обратите внимание, на фотографию ниже, возможна она будет вам полезна для лучшего восприятия текста.

Протокол процедуры. Алгоритм.
Есть три сектора. Они могут быть в пределах одной тарелки, а могут быть специальными лунками. Секторы подписываются I, II и III, в каждый наносят соответствующую сыворотку.
У пациента выдавливают каплю крови, предварительно протерев палец спиртом. И переносят по капле стеклянной палочки в сектора с сыворотками. Затем перемешивают кровь с сывороткой до розового цвета и засекают время. Реакция проходит в течение пяти минут. Необходимо помнить, что при работе с каждой следующей сывороткой палочка меняется, чтобы не допустить искажения результатов из-за смешения сывороток. По прошествии указанного времени в лунки добавляют изотонический раствор NaCl и перемешивают.

Положительный результат реакции выглядит как красные зёрна, образованные слипшимися эритроцитами, при отрицательном — смесь сохраняет равномерную розовую окраску. Реакция протекает в течение 3-4 минут.

Анализ результатов
Дальнейшее определение групп крови – это элементарная комбинаторика. Если результат в трёх лунках отрицательный, то это группа 0, если прошла реакция только с II и I сыворотками, то группа A, только с I и III – B, а если с обеими – то AB. Все прочие комбинации – являются артефактом и указывают на неверное проведение процедуры анализа.
У ошибок могут быть разные причины. Самые частые это – использование слабых сывороток, у которых закончился срок годности; проведение анализа со слишком большой каплей крови пациента – она должна быть на порядок меньше, чем количество сыворотки, неспецифическая холодовая агглютинация при температуре среды, не соответствующей нормальной и слишком долгое время проведения реакции. Во время подсыхания на периферии смеси образуется зернистость, которая не должна учитываться при оценке группы крови.