Правильная сдача анализа кала. Исследование антигена хеликобактер пилори в кале Анализ кала на антитела к хеликобактер

Сдавать анализ на хеликобактер пилори можно несколькими способами: сдать кровь или кал на анализ, провести дыхательный тест. Нужна тщательная подготовка.

Иногда человек может и не подозревать, что в его организме уже обитают эти бактерии, пока толчком к развитию заболеваний не станут стрессы, неправильное питание, злоупотребление спиртным, курение и т.д. Согласно статистике, более 70% людей старше 40 лет являются носителями хеликобактер пилори, но у инфицированных не наблюдаются симптомы заболеваний.

Если же человек ослаблен, то бактерии начинают стремительно размножаться, выделяют токсины, которые, накапливаясь в большом количестве, поражают слизистую оболочку внутренних органов. Сначала появляются воспаления. Если ничего не делать, вскоре возникнут эрозии или язвы, могут дать о себе знать и опухоли.

Анализ на хеликобактер пилори может сдать любой желающий, но врачи назначают его тем, кто уже страдает от язвы желудка или двенадцатиперстной кишки, гастрита или же, если эти бактерии были найдены у одного из членов семьи (проживающим вместе с ними), или же у близкого родственника выявили рак желудка.

Также лечащего врача могут насторожить следующие симптомы, при наличии которых от попросит сдать анализ на хеликобактер:

Пациент мучается от тяжести в желудке.
Ему тяжело усваивать белковую пищу, т.е. есть мясо.
У него появилась изжога, метеоризм, отрыжка, часто тошнит, рвет.
Болит желудок, боли стихают, если человек поел.
Пациент жалуется на нарушение аппетита или же на затрудненное глотание.
Человек сильно похудел.
У него постоянные запоры или же понос.

Как сдавать анализы

Вы решили сдать анализ на наличие бактерий Хеликобактер пилори. Как это сделать, как подготовиться к анализу?

Прежде всего, нужно знать, что есть несколько способов это сделать, и лучше надеяться не на один из них, а провести хотя бы 2 исследования.

Расскажем о каждом виде обследования и о подготовке к нему.

Анализ крови

Врач может попросить вас сдать анализ крови, чтобы посмотреть, есть ли в ней антитела к хеликобактер пилори.

Наш организм борется с инфекцией и вырабатывает специальные антитела, которые связываются с возбудителем болезни, чтобы нейтрализовать его. Если в крови пациента есть эти антитела, то можно говорить о том, что он заражен. Анализ крови сдается утром, кровь собирают из локтевой вены.

Подготовка к нему стандартная, но все же не мешает о ней напомнить:

Нельзя принимать лекарства и употреблять спиртные напитки за 2 дня до сдачи анализов.
Перед тем, как идти в лабораторию, нельзя заниматься спортом или ходить в баню.
Перед сдачей анализа не стоит есть жирные и острые продукты.
Нужно избегать стрессов, беречь себя, не нервничать.
Кровь на анализ хеликобактер пилори надо сдавать натощак, т.е. последний прием пищи должен быть накануне вечером. Утром нельзя завтракать, даже пить сок, кофе или чай, а также курить.

Уреазный дыхательный тест

Бактерия Хеликобактер пилори синтезирует уреазу, это особый фермент. Он может влиять на мочевину, расщепляя ее на углекислый и аммиак в отделах кишечника. Проводя исследование, смотрят, какая концентрация этих веществ в выдыхаемом воздухе до приема мочевины и после нее. Расскажем более подробно, как проводится дыхательный тест на хеликобактер пилори.

Сначала пациент дышит через специальную трубку. Не стоит волноваться и переживать, дыхание должно быть таким же, как и в обычной жизни. После того, как были получены результаты, человеку предлагают выпить раствор карбамида (5%). Необходимо подождать 5 минут, а потом снова взять пробу.

Чтобы определить, заражен человек или нет, необходимо проверить концентрацию аммиака в выдыхаемом воздухе. Если она достаточно высокая (более 0,5 мг/мл), то тест – положительный. Чтобы тест был правильным, в трубку не должна попадать слюна. Если не получается ее сглатывать, то можно иногда вытаскивать трубку.

В случае попадании слюны придется повторить обследование.

Как подготовиться к исследованию:

Нельзя принимать препараты, которые понижают кислотность желудочного сока. Стоит от них отказаться за 3 недели до обследования. Это антацидные средства, антибиотики и т.д.
На время придется забыть об алкогольных напитках. Не стоит их принимать как минимум за 3 дня до обследования.
За день до того, как вы пойдете сдавать анализ, нельзя есть продукты, которые способствуют газообразованию: черный хлеб, капусту, горох, картошку и т.д.
Проходить тест надо натощак, перед этим ужинать легкой пищей.
До того, как обследоваться, т.е. утром, нельзя курить и завтракать.
За сутки не жевать жевательную резинку, которая способствует сильному слюноотделению.

Как мы видим, подготовка к тесту не сложная, но ее лучше начать заранее.

Анализ кала

Чтобы определить, есть ли в организме бактерии хеликобактер пилори, можно сдать анализ кала. Перед тем, как сдавать кал на анализ, за 3 дня до того, как вы будете собирать материал, необходимо отказаться от красящих веществ и пищевых волокон, нельзя принимать лекарства от запора.

Бактерия Helicobacter pylori (хеликобактер пилори) обитает в клетках слизистой оболочки желудка и двенадцатипёрстной кишки человека. Некоторые штаммы (генетические типы) микроорганизма выделяют специфические токсины, разрушающие клетки и повышающие риск возникновения таких патологий, как хронические гастриты и дуодениты, язвенная болезнь желудка и двенадцатипёрстной кишки, некоторые виды злокачественных опухолейа. Такие штаммы необходимо своевременно выявлять и лечить. Одним из способов определения инфицирования Helicobacter pylori является анализ кала.

Механизм определения хеликобактера с помощью анализа кала

ПЦР (полимеразная цепная реакция), культуральный и иммунологические анализы кала относятся к прямым методам исследования. В отличие от косвенных методов, когда о наличии патологического агента судят по присутствию продуктов его жизнедеятельности или реакции иммунной системы организма (выработка антител), прямые методы обнаруживают непосредственно сам микроорганизм или его ДНК.
Все виды анализа кала на хеликобактериоз являются неинвазивными (нетравматичными) видами исследования в отличие от забора крови или гастродуоденоскопии.

Молекулярная диагностика

Для проведения ПЦР используют специальный прибор - амплификатор

ПЦР-метод является одним из видов молекулярно-генетической диагностики и позволяет определить наличие Helicobacter pylori даже в случае присутствия в материале небольшого фрагмента ДНК бактерии.

Суть метода состоит в многократном умножении анализируемого образца возбудителя заболевания. Для проведения реакции необходим своего рода «каркас», состоящий из двух праймеров – полученных с помощью искусственного синтеза фрагментов ДНК, идентичных нуклеиновой кислоте Helicobacter pylori. Во время реакции между праймерами наращивается цепочка ДНК в случае присутствия в кале фрагмента биоматериала микроорганизма. В случае его отсутствия реакции не происходит.

Реакция проводится при определённых значениях температуры и кислотности среды, состоит из нескольких десятков повторяющихся циклов, для катализа (ускорения реакции) применяется специальный фермент – полимераза. За 30 циклов фрагмент ДНК патологического агента, присутствующий в биоматериале, умножается в миллиард раз, что позволяет с точностью диагностировать инфекцию.

При наличии соответствующих праймеров можно выявить инфицирование цитотоксичными (повреждающими клетки слизистой желудка) видами Helicobacter pylori.

Культуральный анализ

Культуральный анализ (бактериологический посев) является микробиологическим методом исследования.

Биологический материал помещается в специфическую среду, благоприятную для роста бактериальной колонии. По истечении определённого срока (для Helicobacter pylori – более недели) культуру изучают под микроскопом, используя для верной идентификации колонии различные методы – окраску, способность вступать в те или иные биохимические реакции.

Кроме выявления патологического антигена (возбудителя заболевания) метод позволяет провести тест на его чувствительность к антибактериальным препаратам, что сокращает сроки и затраты на лечение, повышает эффективность терапии.

К сожалению, в некоторых случаях результаты теста на чувствительность in vitro («в пробирке») могут не совпадать с результатами лечения in vivo (живого организма): в жизни антибиотики, подобранные лабораторным методом, могут быть не столь эффективны.

Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы основаны на свойстве антител слипаться с антигеном. Для исследования антитела со специальными метками соединяются с анализируемым образцом, в результате, при наличии в материале Helicobacter pylori, образуются комплексы антиген-антитело.

Показания к проведению обследования

Все виды диагностики инфицирования Helicobacter pylori имеют свои преимущества и недостатки. Целесообразность применения того или иного метода зависит от разных факторов и этапов лечения. Оптимальный способ исследования выбирает врач-гастроэнтэролог .

Показания к ПЦР-анализу кала:

язвы, и двенадцатипёрстной кишки;
атрофия слизистой оболочки желудка;
полипы, опухоли желудка;
гастроэзофагеальный рефлюкс (заброс содержимого желудка в пищевод), язва пищевода;
генетическая предрасположенность: злокачественные опухоли желудка у ближайших родственников (родителей, родных братьев и сестёр);

Исследование ПЦР-методом оптимально назначать для оценки целесообразности проведения специфического лечения антибактериальными препаратами при имеющихся органических повреждениях.

Показание к культуральному анализу – определение чувствительности к лекарственным препаратам при неэффективности эмпирического лечения. Поскольку анализ является сложным (посев требует специальной среды и отсутствия доступа кислорода) и долгосрочным, это исследование не назначается для диагностики инфекции.

Бактериологический посев способен выделять только спиралевидные формы Helicobacter pylori, но не кокковые, получившие в последнее время широкую распространённость. Этот факт дополнительно снижает ценность исследования.

Показания к иммунологическим методам:

симптомы функциональных и органических патологий желудка и кишечника:
- , отрыжка;
- боли, имеющие периодичность в течение суток с обострениями весной и осенью;
- поносы или запоры;
- ощущение дискомфорта, переполнения желудка;
перед назначением длительной терапии нестероидными противовоспалительными препаратами или ингибиторами протонной помпы (средствами для снижения выработки соляной кислоты);
железодефицитная анемия или тромбоцитопения невыясненной этиологии;
генетическая предрасположенность;
инфицирование ближайшего окружения;
контроль эффективности антибиотикотерапии.

Иммунологические методы и ПЦР без генотипирования назначаются с целью скрининга – ввиду простоты и относительно низкой стоимости исследование проводится широким массам населения для выявления группы риска развития органических и опухолевых поражений желудка и кишечника.

К сожалению, в России скрининг на Helicobacter pylori не получил широкого распространения.

Иммунологический анализ проводится до инструментальных методов исследования при соответствующей симптоматике и позволяет предположить инфицированность Helicobacter pylori. По результатам анализа в случае необходимости назначаются другие методы исследования.

Преимущества и недостатки ПЦР-анализа кала

Специфическая терапия хеликобактериоза антибактериальными препаратами – процесс длительный, сопровождающийся плохой переносимостью у многих больных и высоким риском развития осложнений.

Назначение антибиотиков всем лицам, инфицированным Helicobacter pylori, - порочная практика. Специфическая антибиотикотерапия показана лишь пациентам с тенденцией к прогрессированию органических поражений – эрозий, язв, атрофического процесса, - как правило, заражённым определёнными штаммами хеликобактера. Этим больным требуется антибиотикотерапия с целью достижения ремиссии при язвенной болезни и предупреждения риска развития злокачественных новообразований.

Выявить цитотоксичные типы Helicobacter pylori можно только посредством ПЦР-метода.

Преимущества ПЦР-анализа кала:

высокая чувствительность метода;
высокая специфичность теста;
простота и неинвазивность забора материала;
безопасность;
возможность выделения как спиралевидных, так и кокковых форм Helicobacter pylori;
возможность выделения различных штаммов бактерии.

Чувствительность теста – способность к выдаче истинно положительных результатов. Чем выше чувствительность, тем ниже доля ложноположительных результатов, когда антиген якобы выявляется у неинфицированных лиц.

Специфичность теста – показатель, зависящий от количества ложноотрицательных (когда у инфицированного больного антиген не выделяется) результатов исследования. ПЦР-метод исследования кала на Helicobacter pylori характеризуется чувствительностью 64–94% и стопроцентной специфичностью.

Собрать кал легко и просто. В отличие от забора крови или гастродуоденоскопии взятие материала не требует применения местных анестетиков, на которые может развиться аллергическая реакция, не причиняет боли и дискомфорта, безопасно в плане заражения «грязным» инструментом. Исследование не требует приложения определённых усилий, как, например, дыхательный метод, что делает его доступным даже для маленьких детей.

Недостатки ПЦР-анализа кала:

отсутствие возможности определения чувствительности к антибактериальным препаратам;
отсутствие возможности различать текущую инфекцию и успешно излеченную, когда фрагменты ДНК бактерии могут оставаться в фекалиях около месяца;
более низкий показатель чувствительности по сравнению с исследованием биоптата (образца ткани или клеточной массы) слизистой желудка;
относительно высокая стоимость анализа с генотипированием;
строгие требования к персоналу: квалификация, неукоснительное соблюдение правил, аккуратность.

Один из основных недостатков ПЦР-метода является продолжением его основного достоинства: высокая чувствительность теста является причиной ложноположительных результатов в случае контаминации («загрязнения» извне) анализируемого материала.

Подготовка к сдаче анализа

Достоверность результата любого анализа зависит от чёткого выполнения определённых условий на всех этапах, и забор материала – не исключение.

Правила взятия материала:

за трое суток до анализа отменяются антибиотики, слабительные, замедляющие перистальтику препараты, ректальные свечи и некоторые другие лекарства по наставлению врача, поэтому следует предупредить доктора о применении тех или иных лекарственных препаратов;
сбор кала осуществляется в выданную лабораторией посуду, рекомендуется отбирать пробы из трёх разных точек;
биоматериал желательно доставить в лабораторию немедленно; в случае отсутствия такой возможности пробу следует хранить при температуре 2–8 градусов не дольше 24 часов;
если анализ выполняется для оценки эффективности назначенной ранее антибиотикотерапии против Helicobacter pylori, кал собирается не ранее, чем через четыре недели после окончания лечения.

Замедление пассажа каловых масс, запоры могут приводить к разрушению хеликобактера в фекалиях, что является причиной ложноотрицательных результатов. Для повышения достоверности результата врач может назначить перед анализом лёгкое слабительное – лактулозу.

Как и где сдать анализ

Анализы назначает гастроэнтеролог, поэтому перед исследованием на Helicobacter pylori необходима его консультация.

Примерная стоимость исследования кала:

ПЦР-метод с генотипированием – 1200 рублей;
ПЦР без генотипирования – 600 рублей;
чувствительность к антибиотикам – 600 рублей;
иммунологические методы – 400–650 рублей (в зависимости от метода).

Для наиболее точной диагностики Helicobacter pylori необходимо выбирать медицинское учреждение, заслужившее хорошую репутацию.

Результаты исследования

Период обработки анализов, их достоверность зависят от метода определения антигена.

Сроки выполнения, достоверность и интерпретация результатов анализов кала на хеликобактериоз.

	Сроки	Достоверность	Результаты
ПЦР	от 5–6 часов (экспресс-метод) до 2 дней	высокая	1) отрицательный – не выделено ни одного заявленного генотипа бактерии; 2) положительный – хелибактериоз (текущий или в анамнезе), выделено не менее одного из заявленных генотипов
Бактериологический анализ на чувствительность к антибиотикам	7–10 дней	высокая – на чувствительность; низкая – на выявление антигена	1) количество бактерий 0 – хеликобактер не выделен; 2) количество >0 - хелибактериоз; 3) S – чувствительность к указанному антибиотику; 4) R – резистентность (устойчивость) к антибиотику; 5) I – умеренная чувствительность к антибиотику.
Иммунологические методы	1 день	низкая	1) отрицательный - возбудитель не выявлен; 2) положительный - хеликобактериоз

Низкая достоверность иммунологического и культурального анализа объясняется малымсодержанием антигена в фекалиях: если ПЦР-анализ чувствителен и при наличии 10 клеток, то для достоверного результата других методов клеток должно быть хотя бы в 10 раз больше.

Исследование кала на хелибактериоз безопасно, нетравматично и может осуществляться разными методами, позволяющими обнаружить инфекцию, определить штаммы вируса и чувствительность патогена к антибиотикам.

По результатам анализов можно сформировать группу риска, у представителей которой высока вероятность развития язвы желудка и двенадцатипёрстной кишки, злокачественных опухолей желудка; оценить степень риска и минимизировать его своевременным антибактериальным лечением цитотоксичных штаммов хеликобактериоза.

[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Заказать

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, кал.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

атрофического или антрального гастрита;
язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

текущая H. pylori-инфекция;
H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Важные замечания

Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]