Реакция 6 гемагглютинации. Сальмонеллы и брюшные тифы, паратифы

Грамотно проведенный анализ крови помогает обнаружить возбудителей различных сложных заболеваний в организме на ранних стадиях их развития, а порой даже до проявления клинических симптомов болезни. Очень часто врачи назначают пациентам проведение анализа на реакцию агглютинации. Дальше мы разберемся с тем, что это — РПГА анализ крови, когда он применяется и о чем может поведать?

Принцип действия

Реакция непрямой гемагглютинации (называемая также реакцией пассивной гемагглютинации он же РПГА, РНГА) происходит в случае, когда на адсорбировавшие антиген эритроциты воздействуют иммунной сывороткой, которая соответствует данному антигену.

Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности данный метод значительно превосходит остальные серологические анализы. Поэтому ее часто используют для выявления заболеваний, вызванных бактериями или риккетсиями. В качестве антигенов для такого анализа могут выступать бактериальные экстракты, очищенные антигены различных микробов, компоненты бактериальных вакцин.

После попадания болезнетворной бактерии в организм человека, в нем начинают продуцироваться специфические и неспецифические антитела, формируя определенный иммунный ответ. В случае с сифилисом, возбудителем которого считается бледная трепонема, принадлежащая к грамотрицательным спирохетам, в крови человека вырабатываются нетрепонемные или трепонемные антитела. На их выявлении основаны лабораторные диагностические исследования, которые должны подтвердить или опровергнуть наличие возбудителя вируса в организме.

При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, в случае добавления сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, зараженного сифилисом, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

Расшифровка анализа

При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.

На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.

Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

• системных заболеваний соединительной ткани,
• в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
• физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
• гепатита В или С,
• онкологических заболеваний,
• тифа, лептоспироза, туберкулеза,
• ВИЧ-инфекции,
• боррелиоза клещевой этиологии,
• обширных травм или переломов,
• беременности,
• в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.

У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.

Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.

При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.

Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

• человек не болен сифилисом,
• неправильно взята кровь для исследования,
• после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.

В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.

Кому показан анализ?

Врач может направить сдавать кровь на РПГА пациентов в следующих случаях:

• при наличии клинических проявлений сифилиса: язвенных высыпаний, увеличенных лимфоузлов, диффузной алопеции и других,
• при подозрении на возможное инфицирование в случае контакта с уже заболевшими людьми,
• доноров, желающих сдать кровь,
• людей, проходящих ежегодные профилактические осмотры или оформляющих санитарные книжки,
• пациентов с положительной реакцией скринингового теста,
• перед госпитализацией в стационарное лечебное учреждение,
• при предоперационном обследовании,
• для выявления возбудителей сальмонеллеза, дифтерии, дизентерии методом проведения РПГА с соответствующим диагностикумом.

Порядок проведения исследования

На исследование отправляют сданный пациентом образец венозной крови. Для того, чтобы не получить ошибочное заключение, пациенту следует ответственно отнестись к подготовке к анализу. Чтобы результаты теста были достоверными, следует придерживаться таких рекомендаций:

• Сдавать анализ следует только натощак.
• В день проведения анализа можно пить минеральную воду без газа в минимальных количествах.
• Как минимум 30 минут до проведения анализа нельзя курить, а лучше увеличить это время до нескольких часов.
• Прямой запрет налагается на употребление алкогольных напитков.
• Пациенты, которым необходимо регулярно применять какие-либо лекарственные препараты, обязательно должны проинформировать об этом врача, направляющего на обследование.
• В случае недомогания или плохого самочувствия нужно поставить в известность медсестру, выполняющую забор крови, или врачу амбулатории, где нужно сдать анализ.

Отнеситесь ответственно не только к вопросу, где сдать анализ, но и к подготовке к обследованию.

Диагностика других инфекционных заболеваний

Не следует думать, что такое исследование, как РПГА может проводиться только для выявления в организме возбудителя сифилиса.

Анализ с сальмонеллезным диагностикумом позволяет выявить наличие инфекции в пищеварительной системе – сальмонеллы. Начиная с четвертого дня после заражения, организм продуцирует антитела к антигенам сальмонеллы, выявить которые помогает метод РПГА. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции, а про ее наличие скажет положительный титр, нарастающий от 1:200 до 1:800 в острой фазе.

Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать дифтерию и оценить иммунитет после проведения вакцинации. Антитела начинают вырабатываться иммунной системой уже на следующий после заражения день, и остаются в организме на протяжении нескольких недель. Чувствительность данного анализа превосходит бактериологический метод исследования. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.

Дизентерийный маркер при РПГА наиболее точно выявляет шигеллез (бактериальную дизентерию), даже по сравнению методом лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Если больной не получает качественного лечения, то болезнь перетекает в хронический процесс, при котором часто случаются рецидивы. Анализ позволяет диагностировать острую и хроническую фазу диареи, выявить возбудителя дизентерии, отличить бактериальный шигеллез от колоректального рака, эндокринных нарушений или воспаления толстой кишки. Негативная реакция говорит об отсутствии бациллы, а подтверждает ее наличие титр 1:80 для малышей или 1:320 для взрослых.

Проведение исследование с коревым маркером позволяет определить заболевание корью. Такое обследование может стать альтернативой часто проводимому для диагностики кори анализу РТГА.

Итак, РПГА анализ крови – что же это? Подводя итоги, можно смело утверждать, что это современный, высокочувствительный и достоверный метод диагностики различных заболеваний бактериологической этиологии.

Вконтакте

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ

гемагглютина́ция (от греч. háima — кровь и лат. agglutinatio — склеивание), склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием бактерий, вирусов, токсинов и др., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также гемагглютининов. Эритроциты одного животного могут агглютинироваться сывороткой другого вследствие наличия в ней нормальных изогемагглютининов (антител). С помощью реакции Г. устанавливают . Феномен Г. используется при микробиологическом и иммунологическом исследованиях.

Различают прямую, или активную, и непрямую, или пассивную, Г. Прямая Г. обусловлена непосредственным воздействием бактериальных и вирусных агентов на эритроциты. При этом гемагглютинины с помощью фермента муциназы взаимодействуют с расположенными на поверхности эритроцитов рецепторами мукопротеазной природы, вызывая адсорбцию антигена. В результате взвесь эритроцитов (например, курицы) образует широкий осадок в форме зонтика с неровными краями. Эта реакция не является специфической, протекает без участия иммунной сыворотки. Прямую Г. применяют в серологических исследованиях, в частности при определении рабочего разведения антигена, используемого в реакции торможения Г. , в основе которой лежит задержка гемагглютинирующего действия антигена иммунной специфической сывороткой. Прямую Г. используют также для ориентировочной диагностики некоторых вирусных болезней (инфлюэнцы лошадей, чумы птиц, ньюкаслской болезни, гриппа уток). Непрямая Г. (РНГА) основана на способности сенсибилизированных эритроцитов (путём адсорбции на них антигена) агглютинироваться гомологичными антителами иммунной сыворотки. Благодаря высокой чувствительности и специфичности непрямой Г. её применяют для диагностики многих вирусных, бактериальных и риккетсиозных заболеваний. Существует несколько модификаций непрямой Г. — реакции торможения, задержки, нейтрализации антител и др. С помощью РНГА и её модификаций могут быть выявлены как антитела в сыворотке крови животных и человека (при использовании эритроцитов, сенсибилизированных известным антигеном), так и антиген (при использовании эритроцитов, сенсибилизированных определёнными антителами). Для реакции применяют отмытые эритроциты разных видов животных (наиболее часто эритроциты барана и курицы). Способность эритроцитов к адсорбции крупномолекулярных антигенов белковой природы повышается после обработки их танином. Для повышения срока хранения эритроцитов их консервируют формалином. Полученные из формализированных эритроцитов диагностикумы могут длительное время сохранять свою активность. При наличии готовых эритроцитарных диагностикумов постановка реакции значительно упрощается. В ветеринарной практике РНГА применяют для диагностики некоторых (преимущественно вирусных) болезней животных — классической чумы птиц ньюкаслской болезни, оспы коров, инфлюэнцы лошадей, гриппа свиней и уток, пуллороза — тифа птиц и др. См. также , .

Литература:
Лабораторные исследования в ветеринарии, М., 1971;
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера 2 изд., М., 1973.




Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .

Синонимы :

Смотреть что такое "ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ" в других словарях:

гемагглютинация - гемагглютинация … Орфографический словарь-справочник

гемагглютинация - скучивание, агглютигация Словарь русских синонимов. гемагглютинация сущ., кол во синонимов: 2 агглютигация (3) … Словарь синонимов

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ - (от гемо... и лат. agglutinatio склеивание) склеивание и выпадение в осадок взвешенных в жидкости эритроцитов под воздействием различных агентов, напр., антител, бактерий или вирусов. Реакция гемагглютинации применяется для диагностики… … Большой Энциклопедический словарь

Гемагглютинация - процесс склеивания эритроцитов в видимые невооруженным глазом агрегаты. Г. вызывают: 1) Ат к эритроцитарным и гетерофильным Аг; 2) Ат к чужеродным для эритроцитов Аг, адсорбированным на их поверхности (см. Гемагглютина ции реакция пассивная); 3) … Словарь микробиологии

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ - ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ, аглютинация (ску чивание) эритроцитов при смешивании с гомологичными сыворотками. Если человеческие эритроциты сменить с сывороткой того же лица, то при встряхивании получится равномерная взвесь. Если эритроциты одного лица… … Большая медицинская энциклопедия

гемагглютинация - Феномен, лежащий в основе способа определения антител, основанного на агглютинации ими эритроцитов в результате связывания либо с антигенами самих эритроцитов, либо с другими антигенами, искусственно присоединенными к поверхности эритроцитов.… … Справочник технического переводчика - (гем + агглютинация) агглютинация эритроцитов … Большой медицинский словарь

Гемагглютинация - от греч. haima кровь и лат. agglutinatio склеивание), процесс склеивания и последующего осаждения эритроцитов крови; вызывается гемагглютининами (См. Гемагтлютинины), бактериями и вирусами, агентами, способными адсорбироваться на… … Большая советская энциклопедия

гемагглютинация - склеивание (агглютинация) эритроцитов. Развивается, в том числе и при переливании несовместимой крови.

Реакция торможения гемагглютинации

Реакция гемагглютинации

Реакция агглютинации

Реакция агглютинация (РА) - это склеивание и выпаде­ние в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического ра­створа натрия хлорида). Образовавшийся осадок называ­ют агглютинатом.

Для реакции необходимы:

1. Антитела (агглютинины) - находятся в сыворотке больного или в иммунной сыворотке.

2. Антиген - взвесь живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов или других клеток.

3. Изотонический раствор.

Реакцию агглютинации для серодиагностики широко применяют при брюшном тифе, паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта) и др. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном - известный микроб.

При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют при диагностике кишечных инфекций, коклюша и др.

В лабораторной практике пользуются двумя различны­ми по механизму действия реакциями гемагглютинации (РГА).

Первая РГА относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодей­ствии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови.

Вторая РГА не является серологической. В ней скле­ивание эритроцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита - эритроциты барана. Эта реакция позволя­ет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.

Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом, (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию ге­магглютинации. Высокая специфичность реакции тормо­жения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке РГА.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приоб­ретают способность агглютинироваться при взаимодей­ствии с антителами к адсорбированному антигену. Схема РНГА представлена на рис. РНГА широко применяют при диагностике ряда инфекций.

Рис. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). А - получениеэритроцитарного диагностикума; Б - РНГА: 1-эритроцит: 2 - изу­чаемый антиген; 3 - эритроцитарный диагностикум; 4 - антитело изучаемому антигену: 5 - агглютинат.

При помощи РНГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела.

К факторам вирулентности сальмонеллы брюшного тифа относят Vi-антиген, представляющий собой капсульныи полисахарид, защищающий их от фагоцитоза и комплемента. Vi-антиген отсутствует у подавляющего большинства других сальмонелл. За счет микрокапсулы S. typhi и S. paratyphi прилипают к энтероцитам тонкой кишки. После адгезии имеет место частичная колонизация слизистой. При этом большая часть сальмонелл попадает в пейеровы бляшки и фагоцитируется макрофагами, в которых активно размножаются. Из лимфоузлов сальмонеллы попадают в общий ток лимфы, а затем в кровь, вызывая бактериемию. С кровью они проникают в костный мозг и селезенку, колонизируя отдельные участки этих органов и заносятся в желчный пузырь. Там они интенсивно размножаются, поскольку желчь является для них элективной питательной средой. С желчью сальмонеллы проникают в двенадцатиперстную, а затем вторично в тонкую кишку и пейеровы бляшки, где присутствуют Т-эффекторы ГЗТ, выделяющие цитокины. Это приводит, в конечном итоге, к иммунному воспалению, в результате которого может произойти разрыв стенки кишки и возникновение перитонита. При разрушении сальмонелл освобождается эндотоксин, после чего начинается интоксикация организма.

Иммунитет

При брюшном тифе в результате гуморального иммунного ответа в сыворотке крови появляются различные антитела (агглютинины, связывающие комплемент и др.), которые обеспечивают напряженный иммунитет. Кроме того, секреторные иммуноглобулины SIgA, покрывая слизистую тонкой кишки обеспечивают местный иммунитет. Полагают, что при брюшном тифе имеет место и клеточный иммунный ответ в результате образования Т-эффекторов ГЗТ в пейеровых бляшках.

Экология и эпидемиология

Брюшной тиф и паратифы являются антропонозами, в отличие от других сальмонеллезов, которые принадлежат к зооантропонозным инфекциям. Источником инфекции являются больные люди и, особенно, бактерионосители, которые в течение многих лет могут представлять опасность для окружающих. Передача инфекции происходит исключительно оральным путем. Сальмонеллы относительно устойчивы к факторам окружающей среды. Они длительно сохраняются (30-90 дней) в воде открытых водоемов, сточных водах, почве, куда попадают с испражнениями. Растворы дезинфектантов (хлорная известь и др.) оказывают на них губительное действие в течение 2-3 мин.

Брюшные тифы и паратифы

Брюшной тиф и паратифы - острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, длительной постоянной лихорадкой, поражением лимфатических образований кишечника, выраженной интоксикацией, имеющих фекально-оральный механизм передачи. Возбудителями брюшного тифа является Salmonella typhi, паратифа A-S. paratyphi А, паратифа В-51 schottmuelleri, паратифа CS. paratyphi С. Брюшной тиф и паратифы А - типичные антропонозы, возбудители паратифа В и С, кроме человека, могут также вызвать заболевание животных и птиц. Все названные бактерии принадлежат к роду Salmonella, семейства Enterobacteriaceae. Больные или бактерионосители выделяют возбудителей с испражнениями, мочой и слюной. По клинической картине отличить брюшной тиф и паратифы практически невозможно. Окончательный клинический диагноз можно установить только после выделения и идентификации возбудителя.

Взятие материала для исследования

Важное значение для успешного проведения лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов имеет правильный и своевременный забор исследуемого материала в зависимости от фазы патогенеза и сроков брюшнотифозной заболевания. Микробиологические исследования при паратифах проводят так же, как и при брюшном тифе. Исследуемый материал для выделения чистой культуры возбудителя, по возможности, следует принимать до начала антибиотикотерапии. Чаще всего берут кровь, костный мозг, дуоденальное содержимое (желчь), экссудат из розеол, стул, мочу, навоз, спинномозговую жидкость, секционный материал при летальных случаях.

Бактериологические методы исследования

Для ранней диагностики брюшного тифа и паратифов эффективным является выделение возбудителя из крови и костного мозга, в меньшей степени из желчи, мочи, кала и других исследуемых материалов. Посев палочек брюшного тифа и паратифов из кровяного русла или костного мозга имеет абсолютную, 100% диагностическую ценность.

Метод гемокультуры

Тщательно соблюдая правила асептики, кровь больного в количестве 10 мл берут с помощью шприца с локтевой вены в ранние сроки (начиная с первых часов заболевания) и у постели больного сеют во флакон с 100 мл желчного бульона или среды Рапопорт (10% желчный бульон из 2 % глюкозы, 1% индикатора Андраде, перед стерилизацией в среду помещают стеклянную поплавок для улавливания газа).В случае невозможного посева крови у постели больного, его доставляют в лабораторию в пробирке. Сыворотку отделяют от сгустка и используют для серологического исследования. Сгусток тщательно измельчают и засевают на те же среды в соотношении 1:10. Такое разведение необходимо для устранения бактерицидных свойств крови. В более поздние периоды болезни при наличии лихорадки надо пахать 15-20 мл крови и сеять на 150-200 мл питательной среды. Желчные среды является элективных для возбудителей брюшного тифа и паратифов. У маленьких детей кровь для посева берут с мочки уха, пятки или пальца и в меньшем количестве.Засеяны флаконы инкубируют при 37 ° С. На второй день изучают характер роста. При отсутствии роста флаконы оставляют в термостате до 10 дней, а при подозрении на L-формы - до 3-4 недель. Следующие висел на дифференциальные среды делают через 48 и 72 год, на 5 и 10 сутки.Сальмонеллы брюшного тифа вызывают покраснение бульона Рапопорт результате ферментации глюкозы до кислоты, а возбудители паратифа еще и газа, который накапливается в поплавке. Культуру, выросшую во флаконе, высевают на трицукрове среду Олькеницького и Эндо (Плоскирева, Левина, висмут-сульфит-агар). Если культура чистая (при микроскопии грамотрицательные палочки), продолжают работать лишь со средой Олькеницького.Посевы только на Эндо (или другие элективные среды) исследуют в тех случаях, когда на агаре Олькеницького вырастает не чистая культура, что случается редко. В таком случае типичные изолированные колонии пересевают на среду Олькеницького (или скошенный МПА), получают чистую культуру и идентифицируют ее. Колонии всех трех возбудителей на средах Эндо, Левина и Плоскирева бесцветные, нежные, прозрачные, на висмут-сульфитном агаре - черного цвета.

Метод миелокультуры

В фазе паренхиматозной диффузии возбудители брюшного тифа и паратифов можно выделить из костного мозга. Методика стернальной пункции безопасна для больного, она расширила возможности бактериологической диагностики этих заболеваний. Место пункции обрабатывают спиртом, обезболивают новокаином. Для забора материала используют иглу Бира с подвижной муфтой, что позволяет регулировать глубину проникновения иглы. После прокола с помощью шприца отсасывают 0,3-0,5 мл пунктата из грудной кости и сеют в 5-10 мл желчного бульона или среды Рапопорт. Выделение чистой миелокультуры проводят так же, как и при посеве крови. Метод миелокультуры дает положительные результаты чаще метод гемокультуры. Его особенно рекомендуют применять при легких и стертых клинических формах заболеваний.

Метод биликультуры

Для бактериологического исследования желчи проводят дуоденальное зондирование. Сначала через тонкий зонд вводят в двенадцатиперстную кишку 30-40 мл 25% раствора сернокислой магнезии. В лаборатории доставляют пробирки с двумя или тремя порциями желчи (А и В, или А, В, С). Каждую из порций можно сеять отдельно или смесь всех трех вместе в количестве 5-10 мл засевают во флаконы с 50-100 мл селенитовый бульона или среды Рапопорт. Кислый дуоденальное содержимое, беловатый его оттенок и наличие хлопьев делают материал непригодным для бактериологического исследования. Посевы инкубируют при 37 ° С в течение 18-20 ч, выделяют и идентифицируют чистые культуры. Метод заслуживает особого рекомендации для выявления бактерионосителей и установления формирования устойчивого бактерионосительства у реконвалесцентов.

Метод розеолокультуры

Метод розеолокультуры используют в случаях неопределенного течения болезни, когда методы гемо-и биликультуры не дали положительных результатов, а на коже больного типичная сыпь. Кожу в месте локализации розеолы протирают спиртом, острым скальпелем скарификують розеолу до появления капелек лимфы. Стерильной пипеткой на них наносят несколько капель желчного бульона, смешивают и быстро втягивают смесь в Пастеровском пипетку. Посев производят у постели больного в 50 мл селенитовый или желчного бульона. При необходимости доставлять материал в лабораторию конец пипетки запаивают на огне.

Метод уринокультуры

Метод уринокультуры применяют преимущественно для диагностики бактерионосительства у реконвалесцентов. Чаще бактерии в моче обнаруживают на 3-4 неделе болезни. После тщательного туалета наружных половых органов мочу лучше брать с помощью катетера в стерильную посуду. В лаборатории 30-50 мл мочи центрифугируют и осадок сеют в среду обогащения (селенитовый, Мюллера, Кауфмана), а также на 1 -2 чашки со средой Эндо (Плоскирева, висмут-сульфит-агар). Выделение и идентификацию проводят так же, как и при исследовании других материалов.

Метод копрокультуры

Метод копрокультуры для диагностики заболевания используют редко, поскольку бактерии в кале появляются поздно. Чаще его используют для обследования реконвалесцентов на бакгерионосийство и здоровых лиц, которые устраиваются на работу и работающих в системе общественного питания, водоснабжения и детских учреждениях. Материал у больных и реконвалесцентов берут без использования слабительного. Здоровым лицам за 3-4 часа до забора материала дают 30 г магнезиальной соли. Пробу отбирают из жидкой части фекалий. При патологических примесях в испражнениях (слизь, гной, кровь) их включают в взятого материала. Пробы фекалий в количестве 5-10 г вступают деревянным шпателем в специальные стандартные стерильные пластмассовые патроны одноразового использования или стеклянные широкогорлые баночки. На них наклеивают этикетку, где указывают дату забора, фамилия и инициалы больного и цели исследования. Лучше всего посев сделать у постели больного. При невозможности быстро доставить материал в лабораторию, его вносят в консервант в соотношении 1:3. Чаще всего для этого используют жидкость, содержащая 30% стерильный раствор глицерина в фосфатном буфере.В бактериологической лаборатории фекалии сеют одновременно двумя способами - прямым на элективные среды (висмут-сульфит-агар, Плоскирева, Эндо, Левина) и на одну из сред обогащения (селенитовый, Мюллера, Кауфмана). Выбор среды проводит бактериолог.При прямом посеве на соответствующее плотную среду небольшое количество стула размещают в пептонной воде или в 0,85% растворе хлорида натрия и оставляют на 30 мин для оседания крупных частиц. С поверхности жидкости берут каплю материала и засевают в чашки с элективные среды.Посев на среду обогащения (в нем сальмонеллы размножаются лучше и быстрее, чем сопутствующая микрофлора) одновременно с прямым посевом является обязательным при исследовании здоровых людей на бактерионосительство, поскольку они выделяют небольшое количество бактерий. Однако, в связи с широким применением населением различных антибиотиков, необходимо использовать среды обогащения и при посевах испражнений от больных, особенно при эпидемических показаниях.При посеве на среды обогащения кусочек фекалий эмульгируют в 10 мл этого же среды. Следующий висел из него на плотное элективные среды целесообразно делать уже через 5-6 ч подращивания в термостате.Спинномозговую жидкость исследуют при наличии менингеальных и менингоенцефалитичних синдромов. Посевы гноя, экссудата, мокроты, грудного молока рожениц проводят в таком же порядке, как выше описано. При исследовании секционного материала сеют кровь из сердца, кусочки паренхиматозных органов, содержимое тонкого кишечника. В лаборатории материал растирают в ступках со стерильным песком, переводят в жидкую фазу и исследуют так же, как и стул.

Исследования воды

Исследования воды на выявление тифозных и паратифозных микробов проводят при расследовании водных вспышек заболеваний и других эпидемиологических показаниях. Поскольку возбудители в воде находятся в небольшом количестве, для их надежного обнаружения применяют методы, которые позволяют концентрировать бактерии из исследуемого объема воды. Лучше всего это можно сделать с помощью мембранных фильтров. Для этого 2-3 л воды пропускают через фильтры № 2 (или № 3). Фильтры с адсорбированными на них бактериями опускают в селенитовый бульон или накладывают на висмут-сульфитный агар. Через 8-10 ч инкубации в термостате производят высев из селенитовый бульона на одно из дифференциальных плотных сред с целью получения изолированных колоний и последующего выделения чистых культур. С поверхности фильтров на висмут-сульфит-агаре после 24-48 ч выращивания в термостате пересевают колонии черного цвета на среду Олькеницького и идентифицируют выделены культуры.Если обнаружить возбудителей брюшного тифа и паратифов не удается, можно исследовать воду на наличие соответствующих бактериофагов. Для этого воду сначала фильтруют через фильтр и 1-2 мл фильтрата вносят в стерильную чашку Петри, заливают 15 мл растопленного и охлажденного до 45-50 ° С МПА, тщательно перемешивают. На поверхность застывшего агара засевают секторами культуры возбудителей брюшного тифа и паратифов. Появление негативных колоний свидетельствует о присутствии соответствующего фага.

Идентификация чистых культур

Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, антигенной структуре и фаголизабельнистю. При микроскопии мазков, окрашенных по Граму, брюшнотифозные и паратифозные бактерии имеют вид палочек красного цвета с закругленными концами размером 0,5-0,8 г 1-3 мкм, активно подвижны в висячей или надавленные капли.Рост в МПБ сопровождается помутнением. На МПА вырастают нежные, круглые, гладкие, прозрачные или полупрозрачные колонии размером 2-4 мм. Однако колонии тифозных микробов, имеющих Vi-антиген, мутные. У S. paratyphi В колонии грубые, через несколько дней периферии колоний образуется слизистый валик.На средах Эндо, Левина, Плоскирева колонии бесцветные, прозрачные, тем розоватые (Эндо) или слегка голубоватые (Левина). На висмут-сульфитном агаре брюшнотифозные микробы образуют колонии черного цвета, иногда со светлым ободком. Паратифозные бактерии на этой среде могут образовывать коричневатые или зеленоватые колонии. После снятия колонии на среде остается черный след.На среде Олькеницького тифозная палочка разлагает глюкозу до кислоты (желтеет столбик агара), не ферментируют лактозу и сахарозу (окраска скошенной части не меняется), выделяет сероводород (почернение на грани колонки и скошенной части). Паратифозные бактерии ферментируют глюкозу до кислоты и газа (пожелтение и разрывы столбика агара).Биохимические признаки тифозные-паратифозных микробов изучают при посеве на среды "пестрый" ряда Гисса.Таблица 37Ферментативные свойства эшерихий и тифозные-паратифозннх бактерийБолее надежной является серологическая идентификация выделенных культур в реакции агглютинации с диагностическими сыворотками. Сначала реакцию ставят на стекле с адсорбированными агглютинирующие сыворотками, содержащими антитела к антигенам 09 (S. typhi% 02 (S. paratyphi А) и 04 (S. schottmuelleri). Если выделена культура по биохимическим свойствам сходна с тифозной, но аглютинуеться 09 -сывороткой, ее необходимо проаглютинуваты с Vi-сывороткой.Для постановки реакции агглютинации на предметное стекло наносят каплю соответствующей сыворотки и рядом каплю физиологического раствора Бактериологической петлей набирают культуру из среды Олькеницького, эмульгируют ее в капле физиологического раствора и соединяют с каплей сыворотки. При соответствии культуры и сыворотки появляется агглютинация, по результатам которой определяют принадлежность исследуемой культуры в серогруппы. Серовары устанавливают в реакции агглютинации с монорецепторными Н-сыворотками.В случае отсутствия в лаборатории адсорбированных монорецепторными сывороток ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках (р-ция Грубера) с видовыми тифозных и паратифозных сыворотками. Диагностическую сыворотку необходимо разводить до титра, указанного на этикетке ампулы. Если реакция агглютинации выпадает до титра, или по крайней мере до половины титра, тогда культура соответствует виду сыворотки.

Фаготипирование выделенных культур

Большое эпидемиологическое значение,-особенно для установления источника инфекции, имеет фаготипирования тифо-паратифозных микробов. Возбудители брюшного тифа с Vi-антигеном лизируются Vi-бактериофагами. их насчитывают 86 типов. Все они высокоспецифические. Есть наборы фагов и для титрования паратифозных сальмонелл.Для фаготипирования берут молодые культуры (4-6-часовые) исследуемых штаммов, наборы типовых бактериофагов в тест-разведениях и стандартное свежеприготовленной и хорошо подсушенную среду. Культуру засевают сплошным газоном, чашечки обязательно подсушивают в термостате. На поверхность газона пастеровской пипеткой, штампом-репликатором или калибровочной петлей наносят типичные фаги. Предварительно дно чашки размечают на квадраты, в которых вписывают номер типового фага. После подсыхания капель чашки инкубируют в термостате 5-6 ч и учитывают результаты. Фаготип устанавливают по наличию лизиса культуры соответствующим фагом. Для определения источника инфекции проводят также колицинотипування сальмонелл.В последнее время в хорошо оснащенных микробиологических лабораториях используют более чувствительные и специфичные методы лабораторной диагностики брюшноготифа и паратифов. Так, для выявления О-и Vi-антигенов в крови, кале и других материалах применяют РСК, реакцию непрямой гемагглютинации с эритроцитарными антител ьнимы (О-и Vi) диагностику мамы. Перспективное также использование реакции коаглютинации, агрегат-агглютинации и ИФА. Для ускоренной идентификации возбудителей брюшного тифа и паратифов применяют ДНК-зонд, который несет на себе ген Vi-антигена. Результат получают через 3-4 часа.

Серологическое исследование

Серологическое исследование проводится как для диагностики заболевания, так и для установления бактерионосительства. С диагностической целью ставят развернутую объемную реакцию Видаля и РИГА с О-и Vi эритроцитарными диагностикумами. РИГА более надежная и специфична. В последнее время все шире используют выявление антител с помощью метода ИФА. Диагностическая ценность серологических реакций значительно повышается при постановке их методом парных сывороток.

Реакция Видаля

Агглютинины к возбудителей брюшного тифа и паратифов обнаруживают в сыворотке крови, начиная с 8-10 дня заболевания и позднее. Динамика их накопления весьма своеобразна: сначала появляются антитела к О-антигену, но их титр быстро уменьшается после выздоровления. Н-и Vi-антитела появляются позже, но годами сохраняются в высоких титрах после болезни, прививок и в бактерионосителей. В этой "связи для правильной оценки серологической реакции важно одновременно обнаруживать все типы агглютининов.Для постановки реакции агглютинации Видаля необходимо три компонента: 1) антитела (сыворотка больного) 2) антиген (бактериальный или эритроцитарный диагностикум) 3) 0,85% раствор хлорида натрия (электролит).Для получения сыворотки у больного из вены, пальца или мочки уха в стерильную пробирку берут 2-3 мл крови, ставят ее в термостат на 30 мин для свертывания. Образовавшийся сгусток обводят пастеровской пипеткой, отделяя его от стенок пробирки, помещают на 30-40 мин в холодильник, отсасывают сыворотку и делают ее рабочее разведение 1:50. Затем в шести параллельных рядах аглютинацийних пробирок делают следующие разведения сыворотки от 1:100 до 1:1600 по стандартной схеме.В качестве антигенов для реакции агглютинации используют брюшнотифозные монодиагностикумы 09 и Hd, а также паратифозные О-и Н-диагностикумы. Они являются 3-х млрд взвеси указанных бактерий, убитых нагреванием или формалином. О-диагностикумы готовят кипячением культур или обрабатывают их спиртом, Н-диагностикумы - обработкой культур формалином. В каждую пробирку ряда, кроме шестой, (контроль сыворотки - КС) добавляют по 2 капли диагностикума. Седьмая пробирка является контролем диагностикума (КД). Штативы с пробирками энергично встряхивают и ставят на 2 ч в термостат, после чего делают предварительный учет результатов реакции. Окончательный учет проводят через 18-20 ч нахождения пробирок при комнатной температуре. При положительной реакции агглютинации образуется белесый осадок на дне пробирки с более-менее прозрачной жидкостью над ним. При отрицательной реакции жидкость остается мутной, осадок на дне пробирки отсутствует. Агглютинацию считают специфической, когда в контрольных пробирках (КС и КД) аглютинат не образуется. При учете результатов обращают внимание на характер аглютинатив: О-агглютинация будет мелкозернистой, а Н-агглютинация - крупнопластивцевою.При типичной клинической картине брюшного тифа диагностическим титром реакции Видаля у больных, не прививались, считают разведение 1:100 и выше, при атипичных или стертых формах заболевания - не ниже 1:200. В последнее время реакции Видаля не считают очень специфической. Она может быть положительной и при других заболеваниях, сопровождающихся лихорадкой, после прививки или ранее перенесенной болезни и т.п.. И все же высокая специфичность реакции может быть обнаружена при ее постановке в динамике методом парных сывороток. Ни анамнестические, ни прививочные или групповые антитела не покажут нарастание титра со второй сывороткой, взятой через 10-12 дней. Все эти особенности в какой-то мере ограничили постановку этой реакции с диагностической целью. Особенно это проявляется при раннем лечении больных антибиотиками. Последние во многом инактивируют антигены (возбудители), титр антител у таких пациентов низкий и не может считаться диагностическим.

Реакция Vi-гемагглютинации

При серологической диагностике брюшного тифа и паратифов последнее время широко используют РНГА, особенно для выявления Vi-антител. Она относится сначала с комплексным эритроцитарным диагностикумом АВСД, затем с брюшнотифозная эритроцитарным 09 - и Hd диагностикумом, и, наконец, с Vi-эритроцитарных диагностикумов.Vi-антитела при брюшном тифе не имеют значительного диагностического или прогностического значения. Обнаружение этих антител имеет важное значение для выявления лиц, подозрительных на бактерионосительство.Реакцию ставят в пластмассовых планшетах с лунками. Кровь у больных или бактерионосителей берут так же, как и для реакции Видаля. Сыворотку разводят в лунках от 1:10 до 1:160 в объеме 0,5 мл. В каждую лунку затем вносят по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Планшеты ставят в термостат на 2 ч, затем оставляют при комнатной температуре еще на 18-20 час. Результаты учитывают по чотириплюсовою системе: + + + + - эритроциты полностью аглютинувались, на дне лунки рыхлый осадок в виде опрокинутой "зонтика"; + + + - "зонтик" меньше, не все эритроциты аглютинувались; + + - аглютинат маленький, есть осадок неглютинованих эритроцитов; (-) - негативная реакция, на дне лунки плотный осадок эритроцитов в виде "монетного столбика".Диагностическое значение имеет реакция в титре 1:40 и выше. Но для постановки окончательного диагноза "бактерионосительство" нужно обязательно выделить чистую культуру возбудителя методом копробили-или уринокультуры.

Постановка аллергической пробы

Как вспомогательный метод диагностики брюшного тифа используют кожную аллергическую пробу с Vi-тифином, содержащий Vi-аллерген, который при взаимодействии с Vi-антителами вызывает местную аллергическую реакцию кожи в виде покраснения и отека через 20-30 мин. Проба с Vi-тифином становится положительной в период реконвалесценции и может быть использована для ретроспективной диагностики.

Профилактика и лечение

В настоящее время применяется химическая, адсорбированная на геле окиси алюминия тифопаратифозно-столбнячная вакцина (TABte). Она состоит из полных антигенов сальмонелл брюшного тифа, паратифов А и В и столбнячного анатоксина. Хорошие результаты наблюдаются при использовании вакцины, содержащей Vi-антиген S. typhi. Для лечения тифопаратифоз-ных инфекций используют хлорамфеникол и другие антибиотики, действующие на грамотрицательные бактерии.

Реакция агглютинации - это иммунная реакция взаимодействия антигена с антителами в присутствии электролитов, причем антиген находится в корпускулярном состоянии (эритроциты, бактерии, частицы латекса с адсорбированными антигенами). При агглютинации происходит склеивание корпускулярных антигенов антителами, что проявляется образованием хлопьевидного осадка. Образование хлопьев происходит за счет того, что антитела имеют два активных центра, а антигены поливалентны, т.е. имеют несколько антигенных детерминант. РА применяют для идентификации возбудителя, выделенного из материала больного, а также для обнаружения в сыворотке крови больного антител к возбудителю (например, реакции Райта и Хеддлсона при бруцеллезе, реакция Видаля при брюшном тифе и паратифах).

Самый простой способ постановки РА - реакция на стекле, это ориентировочная РА, которая применяется для определения возбудителя, выделенного от больного. При постановке реакции на предметное стекло наносят диагностическую агглютинирующую сыворотку (в разведении 1:10 или 1:20), затем вносят культуру от больного. Реакция положительная, если в капле появляется хлопьевидный осадок. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. Если диагностическая агглютинирующая сыворотка неадсорбированная 1 , то ее разводят (до титра - разведения, до которого должна происходить агглютинация), т.е. ставят развернутую РА в пробирках с увеличивающимися разведениями агглютинирующей сыворотки, к которым добавляют по 2-3 капли взвеси возбудителя, выделенного от больного. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости в пробирках. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Реакция сопровождается контролями: сыворотка, разведенная изотоническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе - равномерно мутной, без осадка.

Для определения в сыворотке крови больного антител к возбудителю используют развернутую РА. При ее постановке в пробирках разводят сыворотку крови больного и добавляют в пробирки равное количество взвеси диагностикума (взвесь убитых микробов). После инкубации определяют наибольшее разведение сыворотки, при котором произошла агглютинация, т.е. образовался осадок (титр сыворотки). При этом реакция агглютинации с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-антиген) - крупнохлопчатая и протекает быстрее.





Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА) является разновидностью РА. Этот метод обладает высокой чувствительностью. С помощью РНГА можно решить две задачи: определить антитела в сыворотке крови больного, к которой добавляют антигенный эритроцитарный диагностикум, представляющий собой эритроциты, на которых адсорбированы известные антигены; определить наличие антигенов в исследуемом материале. В этом случае реакцию иногда называют реакцией обратной непрямой гемагглютинацией (РОНГА). При постановке к исследуемому материалу добавляют антительный эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорбированными на их поверхности антителами). Эритроциты в этой реакции выполняют роль носителей и пассивно вовлекаются в образование иммунных агрегатов. При положительной реакции пассивно склеенные эритроциты покрывают дно лунки ровным слоем с фестончатыми краями («зонтик»); при отсутствии агглютинации эритроциты скапливаются в центральном углублении лунки, образуя компактную «пуговку» с резко очерченными краями.

Реакция коагглютинации используется для определения клеток возбудителя (антигенов) с помощью антител, адсорбированных на Staphylococcus aureus, содержащем белок А. Белок А обладает сродством к Fc-фрагменту иммуноглобулинов. Благодаря этому антитела связываются с стафилококком опосредованно через Fc- фрагмент, а Fab-фрагменты ориентированы наружу и способны взаимодействовать с соответствующими микробами, выделенными от больных. При этом образуются хлопья.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) используется при диагностике вирусных инфекций, причем только инфекций, вызываемых гемагглютинирующими вирусами. Эти вирусы содержат на своей поверхности белок - гемагглютинин, который ответствен за реакцией гемагглютинации (РГА) при добавлении к вирусам эритроцитов. РТГА заключается в блокировании антителами вирусных антигенов, в результате чего вирусы теряют способность агглютинировать эритроциты.





Реакция Кумбса - РА для определения неполных антител. При некоторых инфекционных заболеваниях, например при бруцеллезе, в сыворотке крови больного циркулируют неполные антитела к возбудителю. Неполные антитела называют блокирующими, так как они имеют один антигенсвязывающий участок, а не два, как полноценные антитела. Поэтому при добавлении антигенного диагностикума неполные антитела связываются с антигенами, но не склеивают их. Для проявления реакции добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела к иммуноглобулинам человека), которая приведет к агглютинации иммунных комплексов (антигенный диагностикум + неполные антитела), образовавшихся в первой стадии реакции.

Непрямую реакцию Кумбса применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают неполные одновалентные антирезусные антитела. Они специфически взаимодействуют с резусположительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Поэтому в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку, что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состояния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например гемолитическую болезнь новорожденных, обусловленную резус-конфликтом.

РА для определения групп крови основана на агглютинации эритроцитов антителами иммунной сыворотки к антигенам групп крови А(II), B(III). Контролем являются сыворотка, не содержащая антител, т.е. сыворотка AB(IV) группы крови, и антигены эритроцитов групп А(П) и B(III). В качестве отрицательного контроля применяют эритроциты группы 0(I), поскольку они не имеют антигенов.

Для определения резус-фактора используют антирезусные сыворотки (не менее двух различных серий). При наличии на мембране исследуемых эритроцитов резус-антигена происходит агглютинация этих клеток.

Реакция гемадсорбции (РГАд). Гемадсорбция - это соединение эритроцитов с поверхностью пораженных вирусом клеток, основанное на родстве рецепторов вируса, находящихся на поверхности пораженной клетки, с рецепторами эритроцита, что приводит к их взаимному сцеплению аналогично реакции гемагглютинации. Преимущество этой реакции состоит в том, что она становится положительной еще до появления отчетливых цитопатических изменений в инфицированных клетках.

Наблюдаютсяразличия в типе адсорбции (диффузный, очаговый), виде сорбируемых эритроцитов (человека, обезьян,морской свинки и др.), температуре, при к-рой протекает реакция (37°С, 0°С), наличии элюции (есть, нет). Г.может быть заторможена предварительной инкубацией инфицированной вирусом к-ры клеток соспецифической к вирусу антисывороткой. Реакцию торможения Г. используют для идентификации вирусов.