Спирохета бледная. Возбудитель сифилиса — бледная трепонема

Сифилис представляет собой хроническое инфекционное заболевание, вызываемое бледной спирохетой, поражающее с различной степенью интенсивности все органы и системы человеческого организма и способное передаваться от больной сифилисом матери плоду в эмбриональном периоде.

Название «сифилис» было введено в 1530 г. прямом Фракастро. Врач Бетенкур в 1527 г. назвал сифилис morbus veriereus или lues venerea, подчеркнув этим предпочтительно половой способ заражения.

Вопрос о времени появления и происхождении сифилиса не может считаться разрешенным. Одни считают, что сифилис привезен в Европу из Америки в конце XV веча, другие полагают, что сифилис существовал в Старом Свете еще задолго до нашей эры.

Возбудитель сифилиса, отличительные признаки его и методы обнаружения

Заразительность сифилиса была очевидна уже для первых врачей, наблюдавших это заболевание. Однако найти возбудителя долго не удавалось.

3 марта 1905 г. Ф. Шаулнн совместно с Э, Гоффманом в отделяемом из папулы на половых органах обнаружили слабо преломляющую свет спирохету, признанную возбудителем сифилиса и названную ими бледной спирохетой (Spirochaeta pallida).

Бледная спирохета (или трепонема)

представляет собой нежное штопорообразное тонкое образование с многочисленными (в среднем 8-12) завитками. При увеличении около 1 000 раз, каким обычно пользуются в современных лабораториях, в темном поле зрения бледная спирохета напоминает тоненькую спираль или штопор с правильными завитками, характеризующимися равномерностью и небольшой крутизной (рис. 45). Обращает на себя внимание прежде всего плавность ее движений, отсутствие стремительных рывков. Спирохета как бы плывет в поло зрения вперед, вращаясь вокруг своей продольной оси и совершая маятникообразные движения. Она обладает упругостью и. то сжимаясь, то распрямляясь, толкает находящиеся перед ней в препарате форменные элементы.

Толщина бледной спирохеты достигает 0,25 микрон., а длина - 6-20 микрон и больше.

Рис. 45. Бледные спирохеты (увеличение 900).


Иначе выглядит бледная спирохета в поле зрения электронного микроскопа. При увеличении в 4 500 раз и больше правильность и равномерность завитков бледной спирохеты утрачиваются. Толщина и окраска ее тела неравномерны; концы имеют более светлую окраску (рис. 46). При увеличении до 15 000 раз удается обнаружить мембрану, представляющуюся в виде оболочки.

Рис. 46. Бледная спирохета в электронном микроскопе (увеличение 15 000).


Бледная спирохета сохраняет подвижность в закрытой влажной камере. Холод, тепло и свет действуют не нее угнетающе. Из химических веществ наиболее сильное действие на бледную спирохету оказывает сулема, которая в разведении 1: 1 000 убивает ее моментально (К. Р. Аствацатуров и П. Д. Юшков). Так же действует и фенол в концентрации 1: 100-1: 200 и трикрезол в концентрации 1: 500.

Получены культуры бледной спирохеты.

Нахождение бледной спирохеты

Очень важный момент в постановке диагноза сифилиса, а результат лабораторного анализа обычно является решающим обстоятельством, заставляющим приступить к противосифилитическому лечению.

Наилучшим методом обнаружения бледной спирохеты является исследование свежего препарата в темном поле. При этом живая спирохета сохраняет не только все свои характерные морфологические признаки, но и особенности движения. Это позволяет легко отдифференцировать ее от других спирохет, похожих на нее, но ничего общего с ней не имеющих.

Для исследования в затемненном поле зрения пользуются микроскопом, у которого обычный конденсор заменен специальным. Из методов окраски бледных спирохет наиболее принят способ Романовского-Гимза.

Быстрее можно приготовить препарат по Бурри: каплю исследуемой жидкости смешивают с каплей китайской туши на тщательно обезжиренном предметном стекле и краем другого стекла распределяют тонким ровным слоем на предметном стекле, как это обычно делается при приготовлении мазков крови. Высушенный на воздухе препарат исследуют под иммерсионной системой. На равномерном серовато-черном фоне бледные спирохеты имеют вид серебристо-белых спиралей.

При описанных методах исследования с целью обнаружения бледных спирохет чрезвычайно важную роль играет способ взятия материала.

Нужно помнить, что под влиянием дезинфицирующих средств бледная спирохета легко исчезает с поверхности сифилитического поражения, и обнаружить се в этих случаях в отделяемом язвочки или эрозии бывает почти невозможно. Поэтому если в день исследования или накануне очаг поражения подвергался воздействию каких-либо дезинфицирующих средств, то нужно сутки или двое прикладывать индифферентные вещества и лишь после этого брать материал для исследования. Лучше всего применять примочки с физиологическим раствором или повязки с диахиловой мазью (Unguentum, Diachylon). Когда больной является для исследования, язву (эрозию) очищают ватным тампоном, смоченным чистым бензином. Это освобождает поверхность поражения от посторонней флоры и раздражает основание поражения, способствуя появлению из глубины тканей жидкости и вымыванию оттуда спирохет. Появившуюся тканевую жидкость берут для исследования па спирохету по одному из описанных выше способов.

Если нет возможности на месте произвести анализ на наличие бледной спирохеты, то полученную тканевую жидкость всасывают в капиллярную часть пастеровской пипетки, запаивают с обоих концов на пламени или закрывают воском и отсылают в лабораторию. Препараты можно с успехом исследовать в темном поле.

В случае отрицательного результата поисков бледной спирохеты необходимо брать материал из увеличенного регионарного бубона путем прокола его иглой и аспирации тканевой жидкости шприцем. Добытый таким путем пунктат исследуют на бледную спирохету.

Бледная трепонема — это бактерия, вызывающая венерическое заболевание «сифилис». Она представляет собой микроорганизм в форме спирали. Благодаря такой форме ее относят к спирохетам — спиралевидным бактериям.

Спирохеты — это группа бактерий, очень похожих между собой. Среди них есть и болезнетворные бактерии, и безобидные. Кроме возбудителя сифилиса, к ним относятся еще и возбудители лептоспироза, возвратного тифа, боррелиоза, а также условно-патогенные (безобидные) бактерии, обитающие на коже человека, в половых путях и на слизистой ротовой полости.

Как выглядит бледная спирохета?

Treponema pallidum – возбудитель сифилиса

Трепонема паллидум имеет малые размеры (четверть микрометра), нитевидную спирально закрученную форму и заостренные концы. В целом, она очень похожа на другие спирохеты. Ее можно отличить по количеству завитков (в среднем, от 7 до 14), а также по характерным движениям: она крутится вокруг своей оси, сгибается, совершает поступательные и волнообразные движения. Длина варьируется от 6 до 10 микрометров, диаметр завитков — около четверти миллиметра.

На фото и под микроскопом похожа на нежное нитевидное образование, почти прозрачного цвета. Бактерия не окрашивается ни одним красителем, поэтому в микробиологии она получила название «бледная». В микробиологии такой этот тип бактерий называют грамотрицательными. Чтобы разглядеть, ее рассматривают на темном фоне, направляя на бактерию свет. Преломляемые ею лучики, отражают свет и позволяют увидеть бактерию. Это довольно непросто, так как, кроме того, что бактерия прозрачная, она живо двигается и ее трудно уловить.

На искусственных питательных средах культивировать возбудителя сифилиса крайне сложно.

Если условия благоприятные, то размножение бледных спирохет происходит каждые 33 часа: бактерия разделяется поперечно на несколько завитков, каждый из которых содержит все структуры полноценной бактерии.

Спирохеты состоят из частей, стандартных для бактерий:

  1. ядро с включенной в него ДНК — тянется по всей длине бледной трепонемы
  2. цитоплазма (протоплазматический цилиндр), в которую включены основные функциональные элементы микроба. В первую очередь в нем обеспечивается синтез белка (в рибосомах) и вырабатывается энергия (в мезосомах)
  3. цитоплазматическая мембрана — переносит извне питательные вещества, участвует в делении клетки и в трансформациях неблагоприятных условий (об этом дальше), плюс служит складом ферментов и антигенов
  4. микрокапсула — наружная клеточная стенка, которая защищает спирохету от внешней среды, в первую очередь от фагоцитов и антител.

На концах бактерии разпологаются выросты-жгутики, с помощью которых она передвигается. Благодаря им treponema pallidum очень подвижна. Насколько она подвижна, можно понять из этого видео:

«Сладкая жизнь», или идеальные условия существования

Treponema pallidum любит тепло, влагу и отсутствие кислорода. Попадая в организм (как правило, половым путем), бактерия как штопор ввинчивается через слизистую оболочку или повреждённую кожу внутрь, и добирается до ближайших лимфатических сосудов и лимфоузлов. Лимфатическая система — это рай для нее. Оптимальная температура (37⁰) и отсутствие кислорода делает эту систему ее любимым местом обитания. С течением времени она распространяется по всей лимфосистеме, а в периоды наибольшей активности — выходит даже в кровь. Это, как правило, сопровождается симптомами вторичного сифилиса — появлением сыпи, распространенной по всей поверхности тела. В течение первичного и вторичного периодов, трепонему можно обнаружить также в сперме, секрете шейки матки, слюне, а также кожных высыпаниях.

Что удивительно, трепонема тяжело переносит вагинальный секрет и редко заселяется на стенках влагалища. Это объясняется любовью бактерии к нейтральной среде (pH 7,4). Кислая среда влагалища обездвиживает бактерию и частично ее нейтрализует. К сожалению, этого не достаточно для предохранения от заражения инфекцией, и бактерия может спокойно поселиться на шейке матки или у входа во влагалище.

Находясь в организме, возбудители сифилиса могут выживать, даже если бактерию захватил и пытается переварить лейкоцит или макрофаг — основные клетки-защитники организма. Такое свойство позволяет бледной трепонеме противостоять неспецифическому иммунитету (то есть специализирующемуся не на конкретном возбудителе болезни, а направленному на врагов вообще).

Трепонема в тяжелых условиях. Тактика выживания

Если в организме создаются неблагоприятные условия для жизни бактерии (например, если человек начинает принимать антибиотики), то она может поменять свою форму на другую, более приспособленную к выживанию. Таких форм две: цистная и -форма.

Даже в этих защитных формах трепонеме вполне реально проникнуть в организм и заразить человека сифилисом. При этом в -форме микробу сделать это становится даже легче, в таком виде так он лучше проникает через барьеры — кожные покровы и слизистые оболочки, в том числе обработанные антисептиками. Если же заражение произошло цист-формой, то более вероятны удлинение инкубационного периода, сифилис в скрытой форме, и развитие устойчивости к лекарствам.

По мере того как сифилис развивается, соотношение между разными формами бледных трепонем, присутствующими в организме, меняется.

  1. На ранних стадиях преобладают стандартные спиралевидные формы. Они еще не проникли внутрь в клетки организма, активно делятся и более уязвимы для антибиотиков.
  2. Во вторичном рецидивном сифилисе уже наблюдается большое количество цист-форм. Микробы, попавшиеся фагоцитам, внедрились внутрь них. Лечение менее эффективно.
  3. При позднем сифилисе стандартных форм заметно меньше, преобладают защитные. Общее количество трепонем снижено.

Во избежание рецидивного (упорного, периодически проявляющегося) течения сифилиса, лечение важно начинать как можно раньше и только (!) под контролем врача

Трепонема вне организма. Сколько времени проживет?

Внешнюю среду treponema pallidum не любит. На сухой поверхности и при высушивании — бактерия погибает почти мгновенно. Во влажной среде и воде сохраняется значительно дольше: во влажных салфетках, носовых платках, белье — она может выживать в течение нескольких суток. Во время стирки вещей (при температуре 60⁰) бледная трепонема обезвреживается в течение пяти-двадцати минут, а при кипячении — в течение нескольких секунд. Холод трепонема переносит несколько легче. В холодильнике, при 0⁰ она может прожить до двух суток. В медицине даже были случаи заражения сифилисом от трупов, пролежавших некоторое время в холодильных камерах.

Также бактерия не любит кислую и щелочную среду. Она мгновенно погибает при использовании хозяйственного мыла и 0,5% растворов щелочей и кислот.

Что может убить трепонему?

Бактерия чувствительна к действию многих растворов антисептиков. Она мгновенно погибает при обработке 0,05% раствора хлоргексидина, 0,001% раствора сулемы, 1-2% раствора фенола и уже 70% спирта.

Водка (40% спирт) убивает возбудителя сифилиса менее эффективно: для полной гибели их необходимо продержать в ней до 20 минут. Также в отношении бледной трепонемы малоэффективен перманганат калия: его для обезвреживания бледных спиротех не используют вовсе.

Для обезвреживания трепонем, уже проникших в организме, используют антибиотики: пенициллины, цефалоспорины, тетрациклины и макролиды. Пенициллины являются основными препаратами, они используются для лечения сифилиса в первую очередь. Остальные антибиотики — препараты резерва: они менее эффективны и их используют только при непереносимости или неэффективности пенициллинов.

Как бледная трепонема обнаруживается в организме

Первый анализ, позволяющий явно выявить возбудителя и диагностировать сифилис, Август Вассерман изобрел в 1906 году. До этого люди ориентировались исключительно по симптомам.

– это венерическое заболевание, имеющее длительное волнообразное течение и поражающее все органы. Клиника заболевания начинается с возникновения в месте внедрения инфекции твердого шанкра (первичной сифиломы), увеличением регионарных, а затем и отдаленных лимфоузлов. Характерно появление на коже и слизистых сифилитических высыпаний, которые безболезненны, не чешутся, протекают без лихорадки. В дальнейшем могут поражаться все внутренние органы и системы, что приводит к их необратимым изменениям и даже летальному исходу. Лечение сифилиса проводит венеролог, в его основе лежит системная и рациональная антибиотикотерапия.

    (Lues) – инфекционное заболевание, имеющее длительное, волнообразное течение. По объему поражения организма сифилис относится к системным заболеваниям, а по основному пути передачи - к венерическим. Сифилис поражает весь организм: кожные покровы и слизистые оболочки, сердечно-сосудистую, центральную нервную, пищеварительную, опорно-двигательную системы. Нелеченный или плохо пролеченный сифилис может длиться годами, чередуя периоды обострений и скрытого (латентного) течения. В активный период сифилис проявляется на коже, слизистых оболочках и внутренних органах, в скрытый период практически ничем не проявляется.

    Сифилис стоит на первом месте среди всех инфекционных заболеваний (в том числе ИППП), по уровню заболеваемости, заразности, степени вреда здоровью, определенным трудностям диагностики и лечения.

    Особенности возбудителя сифилиса

    Возбудитель сифилиса - микроорганизм бледная спирохета (трепонема - Treponema pallidum). Бледная спирохета имеет вид изогнутой спирали, способна двигаться разными способами (поступательно, вращательно, сгибательно и волнообразно), размножается поперечным делением, окрашивается анилиновыми красителями в бледно-розовый цвет.

    Бледная спирохета (трепонема) оптимальные условия в организме человека находит в лимфатических путях и лимфоузлах, где активно размножается, в крови в высокой концентрации появляется в стадии вторичного сифилиса. Микроб долго сохраняется в тёплой и влажной среде (оптим. t = 37°С, во влажном белье до нескольких суток), устойчив и к низким температурам (в тканях трупов – жизнеспособен 1-2 суток). Бледная спирохета погибает при высыхании, нагревании (55°С – через 15 минут, 100°С – мгновенно), при обработке дезинфицирующими средствами, растворами кислот, щелочей.

    Больной сифилисом заразен в любые периоды болезни, особенно в периоды первичного и вторичного сифилиса, сопровождающиеся проявлениями на коже и слизистых. Передается сифилис при контакте здорового человека с больным через секреты (сперму при половом акте, молоко - у кормящих женщин, слюну при поцелуе) и кровь (при прямом переливании крови, во время операций - у медперсонала, пользовании общей опасной бритвой, общим шприцем - у наркоманов). Основной путь передачи сифилиса – половой (95-98% случаев). Реже наблюдается непрямой бытовой путь заражения – через влажные предметы обихода и личные вещи (например, от больных родителей детям). Отмечаются случаи внутриутробной передачи сифилиса ребенку от больной матери. Необходимым условием заражения является наличие в секретах больного достаточного количества патогенных форм бледных спирохет и нарушение целостности эпителия слизистых оболочек и кожных покровов у его партнера (микротравмы: ранки, царапины, ссадины).

    Периоды сифилиса

    Течение сифилиса – длительное волнообразное, с чередованием периодов активного и скрытого проявления болезни. В развитии сифилиса выделяют периоды, различающиеся набором сифилидов - различных форм кожных высыпаний и эрозий, появляющихся в ответ на внедрение в организм бледных спирохет.

    • Инкубационный период

    Начинается с момента заражения, длится в среднем 3-4 недели. Бледные спирохеты распространяются по лимфатическим и кровеносным путям по всему организму, размножаются, но клинические симптомы не проявляются. Больной сифилисом не подозревает о своей болезни, хотя он уже заразен. Инкубационный период может укорачиваться (до нескольких дней) и удлиняться (до нескольких месяцев). Удлинение происходит при приеме лекарственных препаратов, которые несколько инактивируют возбудителей сифилиса.

    • Первичный сифилис

    Длится 6-8 недель, характеризуется появлением на месте проникновения бледных спирохет первичной сифиломы или твёрдого шанкра и последующим увеличением близлежащих лимфатических узлов.

    • Вторичный сифилис

    Может продолжаться от 2 до 5 лет. Происходит поражение внутренних органов, тканей и систем организма, появление генерализованных высыпаний на слизистых оболочках и коже, облысение. Эта стадия сифилиса протекает волнообразно, периоды активных проявлений сменяются периодами отсутствия симптомов. Различают вторичный свежий, вторичный рецидивный и скрытый сифилис.

    Скрытый (латентный) сифилис не имеет кожных проявлений заболевания, признаков специфического поражения внутренних органов и нервной системы, определяется только лабораторными анализами (положительные серологические реакции).

    • Третичный сифилис

    Встречается сейчас редко, возникает при отсутствии лечения спустя годы после поражения. Характеризуется необратимыми нарушениями внутренних органов и систем, особенно центральной нервной системы. Является наиболее тяжёлым периодом сифилиса, приводящим к инвалидности и к летальному исходу. Обнаруживается появлением на коже и слизистой бугорков и узлов (гумм), которые, распадаясь, обезображивают больного. Подразделяют на сифилис нервной системы – нейросифилис и висцеральный сифилис, при котором повреждены внутренние органы (головной и спинной мозг, сердце, лёгкие, желудок, печень, почки).

    Симптомы сифилиса

    Первичный сифилис

    Первичный сифилис начинается с того момента, когда в месте внедрения бледных спирохет появляется первичная сифилома – твёрдый шанкр. Твёрдый шанкр – это одиночная, округлой формы эрозия или язва, имеющая чёткие, ровные края и блестящее синюшно – красное дно, безболезненная и невоспаленная. Шанкр не увеличивается в размерах, имеет скудное серозное содержимое или покрыт пленкой, корочкой, в основании его ощущается плотный безболезненный инфильтрат. Твердый шанкр не поддается местной антисептической терапии.

    Шанкр может находиться на любом участке кожи и слизистых (анальная область, ротовая полость – губы, уголки рта, миндалины; молочная железа , низ живота, пальцы рук), но чаще всего располагается на половых органах. Обычно у мужчин – на головке, крайней плоти и стволе полового члена, внутри уретры; у женщин - на половых губах, промежности, влагалище, шейке матки. Размеры шанкра около 1 см, но могут быть карликовые - с маковое зерно и гигантские (d =4-5 см). Шанкры могут быть множественными, в случае многочисленных мелких повреждений кожи и слизистых на момент заражения, иногда биполярными (на половом члене и губах). При появлении шанкра на миндалинах – возникает состояние, напоминающее ангину, при которой не повышается температура, и горло почти не болит. Безболезненность шанкра позволяет больным не замечать его, и не придавать никакого значения. Болезненностью отличаются щелевидный шанкр в складке анального отверстия, и шанкр – панариций на ногтевой фаланге пальцев руки. В период первичного сифилиса могут наблюдаться осложнения (баланит , гангренизация, фимоз) в результате присоединения вторичной инфекции. Неосложненный шанкр в зависимости от размера заживает через 1,5 – 2 месяца, иногда до появления признаков вторичного сифилиса.

    Через 5-7 дней после возникновения твёрдого шанкра развивается неравномерное увеличение и уплотнение ближайших к нему лимфоузлов (чаще паховых). Может быть односторонним и двусторонним, узлы при этом не воспалены, безболезненны, имеют овоидную форму и могут достигать размера куриного яйца. Ближе к концу периода первичного сифилиса развивается специфический полиаденит – увеличение большинства подкожных лимфатических узлов. У больных может ощущаться недомогание, головная боль , бессонница , повышение температуры, артралгии , мышечные боли, невротические и депрессивные расстройства. Это связывают с сифилитической септицемией – распространением возбудителя сифилиса по кровеносной и лимфатической системе из очага поражения по всему организму. В отдельных случаях этот процесс протекает без лихорадки и недомогания, и переход от первичной стадии сифилиса к вторичной больной не замечает.

    Вторичный сифилис

    Вторичный сифилис начинается через 2-4 месяца после инфицирования и может длиться от 2 до 5 лет. Храктеризуется генерализацией инфекции. На этой стадии поражаются все системы и органы больного: суставы, кости, нервная система, органы кроветворения, пищеварения, зрения, слуха. Клиническим симптомом вторичного сифилиса являются – высыпания на коже и слизистых, которые носят повсеместный характер (вторичные сифилиды). Высыпания могут сопровождаться ломотой в теле, головной болью, лихорадкой и напоминать простуду.

    Высыпания проявляются приступообразно: продлившись 1,5 – 2 месяца, без лечения исчезают (вторичный латентный сифилис), затем появляются снова. Первое высыпание характеризуется обильностью и яркостью окраски (вторичный свежий сифилис), последующие повторные высыпания - бледнее окрашены, менее обильные, но крупнее размерами и склонны к слиянию (вторичный рецидивный сифилис). Частота рецидивов и длительность латентных периодов вторичного сифилиса бывают различными и зависят от иммунологических реакций организма в ответ на размножение бледных спирохет.

    Сифилиды вторичного периода исчезают без рубцов и имеют разнообразие форм - розеолы, папулы, пустулы.

    Сифилитические розеолы представляют собой мелкие округлые пятна розового (бледно-розового) цвета, не поднимающиеся над поверхностью кожи и эпителия слизистых, которые не шелушатся и не вызывают зуд, при надавливании на них бледнеют и ненадолго исчезают. Розеолезная сыпь при вторичном сифилисе наблюдается у 75-80% больных. Образование розеол вызвано нарушениями в кровеносных сосудах, располагаются они по всему телу, в основном на туловище и конечностях, в области лица - чаще всего на лбу.

    Папулезная сыпь представляет собой округлые узелковые образования, выступающие над поверхностью кожи, ярко-розового цвета с синюшным оттенком. Папулы располагаются на туловище, не вызывают никаких субъективных ощущений. Однако при надавливании на них пуговчатым зондом, появляется острая боль. При сифилисе высыпание папул с жирными чешуйками по краю лба образует, так называемую, «корону Венеры».

    Сифилитические папулы могут разрастаться, сливаться друг с другом и образовывать бляшки, мокнуть. Особенно заразны мокнущие эрозивные папулы, и сифилис в этой стадии легко может передаваться не только при половых контактах, но и при рукопожатиях, поцелуях, пользовании общими предметами обихода. Пустулезные (гнойничковые) высыпания при сифилисе похожи на угревую или ветряную сыпь, покрыты коркой или чешуйками. Обычно возникают у больных с пониженным иммунитетом.

    Злокачественное течение сифилиса может развиваться у ослабленных пациентов, а также у наркоманов, алкоголиков, ВИЧ-инфицированных . Для злокачественного сифилиса характерно изъязвление папуло-пустулезных сифилидов, непрерывные рецидивы, нарушение общего состояния, лихорадка, интоксикация, снижение массы тела.

    У больных вторичным сифилисом может возникать сифилитическая (эритематозная) ангина (резко выраженное покраснение миндалин, с белёсыми пятнами, не сопровождающееся недомоганием и лихорадкой), сифилитические заеды в уголках губ, сифилис полости рта . Наблюдается общее легкое недомогание, которое может напоминать симптомы обычной простуды. Характерным для вторичного сифилиса является генерализованный лимфаденит без признаков воспаления и болезненности.

    В период вторичного сифилиса возникают нарушения в пигментации кожи (лейкодерма) и выпадение волос (алопеция). Сифилитическая лейкодерма проявляется в потере пигментации различных участков кожи на шее, груди, животе, спине, пояснице, в области подмышек. На шее, чаще у женщин, может появляться «ожерелье Венеры», состоящее из мелких (3-10 мм) обесцвеченных пятен, окружённых более тёмными участками кожи. Оно может существовать без изменения длительно (несколько месяцев и даже лет), несмотря на проводимое противосифилитическое лечение. Развитие лейкодермы связывают с сифилитическим поражением нервной системы, при обследовании наблюдаются патологические изменения в спинномозговой жидкости.

    Выпадение волос не сопровождается зудом, шелушением, по своему характеру бывает:

    • диффузное - выпадение волос типично для обычного облысения, происходит на волосистой части головы, в височной и теменной области;
    • мелкоочаговое - яркий симптом сифилиса, выпадение или поредение волос мелкими очагами, расположенными беспорядочно, на голове, ресницах, бровях, усах и бороде;
    • смешанное - встречается и диффузное, и мелкоочаговое.

    При своевременно проведённом лечении сифилиса волосяной покров полностью восстанавливается.

    Кожные проявления вторичного сифилиса сопровождают поражения ЦНС, костей и суставов, внутренних органов.

    Третичный сифилис

    Если больной сифилисом не лечился или лечение было неполноценным, то через несколько лет после заражения у него появляются симптомы третичного сифилиса . Происходят серьезные нарушения органов и систем, внешность больного обезображивается, он становится инвалидом, в тяжелых случаях вероятен летальный исход. В последнее время частота развития третичного сифилиса уменьшилась в связи с лечением его пенициллином, редкими стали тяжелые формы инвалидизации.

    Выделяют третичный активный (при наличии проявлений) и третичный латентный сифилис. Проявлениями третичного сифилиса являются немногочисленные инфильтраты (бугорки и гуммы), склонные к распаду, и деструктивные изменения в органах и тканях. Инфильтраты на коже и слизистых развиваются без изменения общего состояния больных, они содержат очень мало бледных спирохет и практически не заразны.

    Бугорки и гуммы на слизистых мягкого и твёрдого нёба, гортани, носа изъязвляясь, приводят к расстройству глотания, речи, дыхания, (перфорации твёрдого нёба, «провал» носа). Гуммозные сифилиды, распространяясь на кости и суставы, кровеносные сосуды, внутренние органы вызывают кровотечения, перфорации, рубцовые деформации, нарушают их функции, что может привести к смертельному исходу.

    Все стадии сифилиса вызывают многочисленные прогрессирующие поражения внутренних органов и нервной системы, наиболее тяжёлая форма их развивается при третичном (позднем) сифилисе:

    • нейросифилис (менингит , менинговаскулит, сифилитические невриты , невралгии, парезы, эпилептические припадки , спинная сухотка и паренхиматозный кератит , гетчинсоновы зубы.

      Диагностика сифилиса

      Диагностические мероприятия при сифилисе включают в себя тщательный осмотр пациента, сбор анамнеза и проведение клинических исследований:

      1. Обнаружение и идентификация возбудителя сифилиса при микроскопии серозного отделяемого кожных высыпаний. Но при отсутствии признаков на коже и слизистых и при наличии «сухой» сыпи применение этого метода невозможно.
      2. Серологические реакции (неспецифические, специфические) ставятся с сывороткой, плазмой крови и ликвором – наиболее надежный метод диагностики сифилиса.

      Неспецифическими серологическими реакциями являются: RPR – реакция быстрых плазменных реагинов и RW - реакция Вассермана (реакция связывания комплимента). Позволяют определять антитела к бледной спирохете – реагины. Применяют для массовых обследований (в поликлиниках, стационарах). Иногда они дают ложноположительный результат (положительный в отсутствии сифилиса), поэтому этот результат подтверждают проведением специфических реакций.

      К специфическим серологическим реакциям относят: РИФ - реакцию иммунофлуоресценции, РПГА – реакцию пассивной гемагглютинации, РИБТ – реакцию иммобилизации бледных трепонем, RW c трепонемным антигеном. Используются для определения видоспецифических антител. РИФ и РПГА высокочувствительные анализы, становятся положительными уже в конце инкубационного периода. Используются в диагностике скрытого сифилиса и для распознавания ложноположительных реакциях.

      Положительными показатели серологических реакций становятся лишь в конце второй недели первичного периода, поэтому первичный период сифилиса делят на два этапа: серонегативный и серопозитивный.

      Неспецифические серологические реакции применяют для оценки эффективности проведенного лечения. Специфические серологические реакции у пациента, переболевшего сифилисом, остаются положительными на всю жизнь, для проверки эффективности лечения их не используют.

      Лечение сифилиса

      Начинают лечение сифилиса после постановки достоверного диагноза, который подтвержден лабораторными анализами. Лечение сифилиса подбирается индивидуально, проводится комплексно, выздоровление должно определяться лабораторно. Современные методы лечения сифилиса, которыми владеет в наши дни венерология , позволяют говорить о благоприятном прогнозе лечения, при условии правильной и своевременной терапии, которая соответствует стадии и клиническим проявлениям болезни. Но подобрать рациональную и достаточную по объему и времени терапию может только врач-венеролог . Самолечение сифилиса недопустимо! Недолеченный сифилис переходит в скрытую, хроническую форму, а больной остается эпидемиологически опасным.

      В основе лечения сифилиса – применение антибиотиков пенициллинового ряда, к которым бледная спирохета проявляет высокую чувствительность. При аллергических реакциях больного на производные пенициллина в качестве альтернативы рекомендуются эритромицин, тетрациклины, цефалоспорины. В случаях позднего сифилиса в дополнение назначают препараты йода, висмута, иммунотерапию, биогенные стимуляторы, физиолечение.

      Важно установить половые контакты больного сифилисом, обязательно провести превентивное лечение возможно зараженных половых партнеров. По окончании лечения все ранее больные сифилисом остаются на диспансерном наблюдении у врача до полного отрицательного результата комплекса серологических реакций.

      В целях профилактики сифилиса проводятся обследования доноров, беременных, работников детских, пищевых и лечебных учреждений, пациентов в стационарах; представителей групп риска (наркоманы, проститутки, бомжи). Сданная донорами кровь обязательно исследуется на сифилис и подвергается консервированию.

Бледная трепонема - это бактерия рода Treponema, вызывающая инфекционное заболевание сифилис. Длина ее составляет от 8 до 20 мкм, ширина - от 0,25 до 0,35 мкм. Имеет форму спирали и напоминает штопор с количеством завитков 8–12 штук. Такой тип строения называют спирохетой, поэтому эта бактерия известна также как бледная спирохета.

Длинное тонкое тело позволяет микробу легко проникать в организм человека сквозь слизистые оболочки. В основном заражение происходит через половые органы.

Что представляет собой трепонема

Бледная трепонема была открыта в 1905 г. немецкими учеными Гофманом и Шаудином. При исследовании Treponema pallidum (лат. название, используется также написание T. pallidum) не обнаруживается методом окрашивания Грама, поэтому за бактерией закрепилось определение «бледная» (лат. pallidum). Имеет 4 подвида, каждый из которых несет угрозу здоровью человека:

Трепонема паллидум имеет тело, покрытое слизистой бесструктурной капсулой, трехслойную клеточную стенку, органеллы (вакуоли, рибосомы, мезосомы), цитоплазму. Концы у нее обычно заостренные, на них имеются выросты-блефаропласты, на которых располагается около 10 фибрилл (нитевидных структур) в виде пучков. Благодаря сокращениям клетки и имеющимся фибриллам бледная спирохета быстро передвигается. На пути к своей цели она совершает разнообразные движения: сгибательные, поступательные, вращательные, винтообразные и т. д.

При неблагоприятных условиях меняются формы бледной трепонемы, она приобретает вид цист и L-форму:

  1. В L-форме трепонемы становятся шаровидными, останавливается их размножение и истончается клеточная стенка, однако рост и синтез ДНК продолжается.
  2. Цисты покрыты защитной оболочкой и могут долго находиться в организме человека в латентном состоянии. Когда условия меняются на благоприятные, цисты становятся зернами, а затем приобретают привычную форму.

Трепонема паллидум чувствительна к ультрафиолету, боится щелочи, уксуса, спирта. Проявляет устойчивость к низким температурам (выдерживает замораживание до 1 года), но при нагревании свыше 50 °C гибнет в течение 15–20 минут. Вне организма человека может прожить не более 3 суток. Является строгим анаэробом, т. е. для энергетического обмена ей не требуется свободный кислород. Сопротивляемость цист и L-формы в несколько раз сильнее.

Признаки сифилиса

Попав в организм человека через слизистую, бактерия продолжает перемещение по лимфатическим и кровеносным сосудам, затем оседает в тканях. Первые признаки заражения обычно появляются через 20–30 дней после проникновения микроба в организм, но иногда это происходит не раньше чем через 3–4 месяца. Выделяют несколько стадий заболевания: первичный сифилис, вторичный и т. д. Каждая из них имеет характерные симптомы.

Первичный сифилис - стадия, возникающая сразу после заражения, симптомы становятся заметны спустя 10–90 дней. Больной может испытывать слабость, головную боль, боль в костях и мышцах, повышение температуры. Иногда ухудшения самочувствия не наблюдается. Часто увеличиваются лимфоузлы. На месте проникновения белой спирохеты образуется сифилома или - небольшой плотный узел диаметром до 1 см, постепенно трансформирующийся в язву.

Шанкр бывает единичный или в количестве нескольких штук и возникает не только на слизистых оболочках, но и на кожных покровах рук, бедер, живота и т. д. Шанкры имеют разновидности, называемые аномальными, их наличие часто сбивает с толку при постановке диагноза:

Вторичная стадия начинается спустя 3 месяца после того, как возбудитель сифилиса проник в организм. Ее длительность может достигать 5 лет. Периодически возникают высыпания на коже (кожные сифилиды), которые проходят сами через несколько недель. Они могут иметь разный вид: белые пятна на шее (« «), гнойники, бледно-розовые пятна на боках и т. д. Зуд и температура отсутствуют. Порой наблюдается локальное облысение. Сифилиды могут поражать слизистую горла в виде ангины и фарингита.

Третичный сифилис наступает спустя несколько лет​​ после заражения. Происходит разрушение внутренних органов, появляются характерные сифилиды на кожных и слизистых покровах. Слизистую и внутренние органы поражают гуммы - опухоли, приводящие к необратимому распаду тканей. На коже появляются бугорковые и гуммозные сифилиды (см. фото).

Выявление и лечение заболевания

Для диагностирования сифилиса проводится комплексное обследование. Сначала пациента осматривает дерматовенеролог на наличие высыпаний на коже и слизистых. Затем проводятся лабораторные исследования материала, взятого из язв и образований у больного. Могут проводиться такие исследования;

  1. Трепонемные серологичекие тесты: РИТБ, РИФ, TPHA, ИФА, иммуноблотинг. Они позволяют выявить антитела к трепономе паллидум.
  2. Нетрепонемные серологические тесты: реакция Вассермана, количественный тест
    VDRL, тест быстрых плазменных реагинов. Определяют наличие антител к фосфолипидам тканей.
  3. Обнаружение трепонемы в очагах поражения: ПЦР, РИФ-Тр, темнопольная микроскопия.

Важно тщательно изучить все признаки, чтобы понять, что это такое, ведь симптомы сифилиса совпадают с симптомами многих других заболеваний. Если диагноз подтвердился, назначается лечение, тип которого зависит от стадии заболевания.

Терапия базируется на приеме антибиотиков. Основой препаратов обычно являются пенициллин, тетрациклин или эритромицин. Если же у пациента третичная стадия, то применяются средства на висмуте, отличающиеся сильной токсичностью. Также может практиковаться внутримышечное введение антибактериальных препаратов, пиротерапия.

Дезинфекция предметов домашнего обихода является обязательной и помогает убить возбудитель за пределами организма зараженного. Кроме того, необходимо провести диагностику и лечение полового партнера.

Содержание статьи

Бледная трепонема

Морфология и физиология

T.pallidum имеет форму спирали, протоплшматический цилиндр, который скручен в 8-12 завитков. От концов клетки отходят 3 периплазматических жгутика. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители, поэтому ее окрашивают краской Романовского-Гимза. Однако наиболее эффективным методом является ее изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе. Микроаэрофил. На искусственных питательных средах не растет. Т. pallidum культивируют в ткани яичка кролика, где она хорошо размножается и полностью сохраняет свои свойства, вызывая у животного орхит. Антигены. Антигенная структура Т. pallidum сложная. Она связана с белками наружной мембраны, липопротеидами. Последние являются перекрестно реагирующими антигенами, общими для человека и крупного рогатого скота. Они используются в качестве антигена в реакции Вассермана для серодиагностики сифилиса.

Патогенность и патогенез

К факторам вирулентности бледной трепонемы относят белки наружной мембраны и ЛПС, проявляющие свои токсические свойства после освобождения из клетки. Вместе с тем, по-видимому, способность трепонемы при делении образовывать отдельные фрагменты, проникающие вглубь тканей, также можно отнести к факторам вирулентности. В патогенезе сифилиса различают три стадии. При первичном сифилисе наблюдается образование первичного очага - твердого шанкра в месте входных ворот инфекции, с последующим проникновением в регионарные лимфоузлы, где возбудитель размножается и накапливается. Первичный сифилис продолжается около 6 недель. Вторая стадия характеризуется генерализацией инфекции, сопровождающейся проникновением и циркуляцией возбудителя в крови, что сопровождается кожными высыпаниями. Продолжительность вторичного сифилиса у нелеченых больных колеблется в пределах 1-2 лет. В третьей стадии обнаруживаются инфекционные гранулемы (гуммы, склонные к распаду), локализующихся во внутренних органах и тканях. Данный период у нелеченых больных продолжается несколько лет и заканчивается поражением ЦНС (прогрессивный паралич) либо спинного мозга (спинная сухотка).

Иммунитет

При сифилисе имеет место гуморальный и клеточный иммунный ответ. Образующиеся антитела не обладают протективными свойствами. Клеточный иммунный ответ связан с фиксацией возбудителя и образованием гранулем. Однако элиминации трепонем из организма при этом не происходит. Вместе с тем неблагоприятные условия среды индуцируют образование трепонемами цист, которые локализуются в стенке кровеносных сосудов. Полагают, что это свидетельствует о переходе заболевания в стадию ремиссии. Наряду с цистами трепонемы образуют L-формы. При сифилисе формируется ГЗТ, которая может быть выявлена кожно-аллергической пробой с убитой взвесью трепонем. Полагают, что проявление третичного периода сифилиса связано с ГЗТ.

Экология и эпидемиология

Сифилис - типично антропонозная инфекция. Болеют только люди, которые являются резервуаром инфекции в природе. Передача инфекции происходит половым путем и значительно реже - через белье и другие предметы. Во внешней среде (воздух) трепонемы быстро погибают.

Сифилис и другие трепонематозы

Сифилис - хроническая инфекционная венерическая болезнь человека, имеет циклический прогрессирующее течение, поражает кожу, слизистые оболочки, внутренние органы и нервную систему. Возбудителем заболевания является Treponema pallidum.Различают три основные периоды развития сифилиса, методы лабораторной диагностики которых имеют свои особенности. В ранний период болезни материалом для лабораторной диагностики служит выделение из твердого шанкра, пунктат с лимфатических узлов, соскобы с розеол, сифилид подобное. При вторичном и третичном периодах исследуют сыворотку крови и ликвор.В связи с тем, что выделение чистых культур трепонем в обычных бактериологических лабораториях невозможно, во время первичного периода болезни (редко позже) проводят бактериоскопический метод диагностики. Начиная с вторичного периода, используют, в основном, серологические методы.

Бактериоскопическое исследования

Перед взятием патологического материала сначала сифилитическую язву протирают ватным тампоном, для удаления сального налета и контаминуючои микрофлоры. Затем дно твердого шанкра раздражают скальпелем или металлической лопаточкой или энергично сжимают язву с боков пальцами в резиновой перчатке к выделению раневого экссудата. При небольшомколичества прозрачной жидкости ее можно внести в каплю 0,85% раствора хлорида натрия. При невозможности взять материал со дна шанкра (фимоз, рубцевание язвы и др.) проводят пункцию регионарных лимфатических узлов.Каплю жидкости из язвы или пунктата наносят на тонкое предметное стекло (1,1-1,2 мм), накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле зрения (краще!), или с помощью фазово-контрастного или аноптрального микроскопа.Бледная трепонема в темном поле зрения имеет вид слегка блестящей тонкой нежной спирали с крутыми равномерными округлыми первичными завитками. Движения плавные, тем она изгибается под углом. Но особенно характерные для нее Маятникообразные колебания. Возбудитель сифилиса необходимо отличать от Treponema refringens (что колонизирует наружные половые органы), которая толще, грубее, с неравномерными крупными завитками и имеет активные беспорядочные движения, но не сгибается. Трепонемы фузосп-ирохетозного симбиоза отличаются тонким рисунком, пологими завитками и беспорядочным движением.При диагностике ротового сифилиса бледную трепонему следует дифференцировать и от зубных трепонем, особенно Т. dentium, а также от Т. buccalis. Первую из них вообще трудно отличить от сифилитического. Она, правда, короче, имеет 4-8 острых завитков, маятникообразное движение отсутствует. Т. buccalis толще, имеет грубые первоначальные завитки и беспорядочное движение.При любых сомнениях нужно учитывать, что все сапрофитные трепонемы, в отличие от бледной, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Они не проникают в лимфатические узлы, поэтому исследования пунктатов имеет большую диагностическую ценность. Выявление в пунктате лимфатических узлов типовых трепонем беспрекословно подтверждает диагноз сифилиса.Итак, темнопольная исследования надавленные капли является наилучшим методом выявления возбудителя сифилиса. Его преимущества заключаются в том, что материал исследуют быстро, а морфология трепонем в живом состоянии наиболее характерна. Тушови мазки по методу Бурри теперь не используют.В случае невозможности провести исследование в темном поле зрения можно использовать различные методы окрашивания. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители. Из многих предложенных способов окраски лучшие результаты получают при использовании окраски по Романовеьким-Гимзе. Изготовленные мазки фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова. Четкость результаты получают, когда краску Романовского-Гимзы наливают в препарат. Для этого в чашку Петри помещают обломки спичек, на них помещают предметное стекло мазком вниз и наливают краситель до тех пор, пока он смочите мазок. Время окраски при этом удваивают. При микроскопии бледные трепонемы имеют нежно-розовый цвет, а другие виды трепонем окрашиваются в синий или сине-фиолетовый цвет.Можно использовать и метод серебрения Морозовым. Трепонемы полностью сохраняют свои морфологические особенности и выглядят под микроскопом коричневыми или почти черными. Но посеребренные препараты долго не хранятся. В последнее время методы окрашивания трепонем применяют редко.Если начато лечение сифилиса химиопрепаратами, выявить возбудитель в патологических материалах даже с помощью темного поля зрения практически не удается. При получении отрицательного анализа его необходимо повторить.

Серологическая диагностика сифилиса

При проведении серологических реакций теперь используют следующие унифицированные в Украине методы исследований: реакции связывания комплемента (РСК), иммунофлуоресценции (РИФ), иммобилизации трепонем (PIT), микрореакцию преципитации (МПР) и иммуноферментный анализ (ИФА).На протяжении многих лет основной и наиболее распространенной реакцией считалась реакция связывания комплемента или реакция Вассермана (РВ, RW). Для ее постановки используют сыворотку крови больного сифилисом и спинномозговую жидкость при поражении нервной системы.Методика постановки реакции Вассермана не отличается от техники проведения РСК. Разница лишь в том, что для РО используют не только специфический трепонемный, а неспецифический кардиолипиновый антиген.l Взятие 5-10 мл крови из локтевой вены проводят натощак или не ранее 6 часов после приема пищи. Нельзя брать кровь у больных с повышенной температурой, после употребления алкоголя и жирной пищи, у беременных женщин за 10 дней до родов и рожениц. Добытую из крови сыворотку прогревают при температуре 56 ° С в течение 30 мин для инактивации собственного комплемента. РО обязательно ставят с двумя антигенами: специфическим и неспецифическим.Специфический ультраозвучений трепонемный антиген готовят из культур бледных трепонем (штамм Рейтера), выращенных в пробирках и подверженных действию ультразвука. Его выпускают в виде лиофильно высушенного порошка. Неспецифический кардиолипиновый антиген готовят путем спиртового экстрагирования липидов с бычьего сердца и очистки от балластных смесей, расфасовывают в ампулы по 2 мл. Для введения антигена в РО его титруют согласно данной инструкции. Непосредственно перед постановкой РВ проводят титрование комплемента и гемолитической сыворотки по такой же схеме, как и в РСК. Реакцию Вассермана ставят как качественным, так и количественным методом. Качественную реакцию проводят в трех пробирках с двумя антигенами по обычной схеме.Результаты реакции оценивают по 4 плюсовой системе: положительная реакция - когда есть полная или значительная задержка гемолиза (4 +, 3 +); слабоположительная реакция - частичная задержка гемолиза (2 +); сомнительная реакция - незначительная задержка гемолиза (1 +). В случае возникновения полного гемолиза РО считают отрицательной.Каждую сыворотку, которая дала положительную качественную реакцию, необходимо исследовать и количественным методом с последовательным ее разведением от 1:10 до 1:640.Титром исследуемой сыворотки (титр реагинов) считают то максимальное ее разведение, при котором наступает полная (4 +) или значка (3 +) задержка гемолиза. Количественный метод постановки РО имеет важное значение для оценки эффективности лечения сифилиса. Быстрое снижение титра реагинов указывает на успешную терапию. Если титр сыворотки долго не снижается, это свидетельствует об отсутствии эффективности применяемых препаратов и необходимость изменить тактику лечения.При пилозри на серонегативный первичный сифилис или скрытый, третичный или врожденный, рекомендуют ставить реакцию Вассермана на холоде по той же схеме. В случае подозрения на нейросифилис РО проводят со спинномозговой жидкостью, которую инактивируют, поскольку она не содержит собственного комплемента. В реакцию вводят неразведенный ликвор и в разведениях 1:2 и 1:5.Реакция Вассермана становится положительной через 2-3 недели после появления твердого шанкра. При вторичном сифилисе она выпадает положительной в 100% случаев, в третичном - в 75%.Кроме того, в комплексе серологических реакций (КСР) как скрининг-тест используют микрореакцию преципитации с плазмой крови или инактивированной сывороткой.

Микрореакция преципитации

Микрореакцию преципитации ставят с кардиолипиновым антигеном. Принцип реакции заключается в том, что при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген-антитело), который осаждается в виде хлопьев белого цвета. Пользуются такой методике: в лунку пластины вносят пипеткой три капли плазмы (или инактивированной сыворотки), затем добавляют одну каплю эмульсии стандартного кардиолипинового антигена. Компоненты реакции смешивают встряхиванием пластины в течение 5 мин, после чего добавляют три капли 0,9% раствора хлорида натрия и оставляют при комнатной температуре еще на 5 мин. Обязательном контроле со слабоположительный сывороткой крови. Результаты оценивают невооруженным глазом над искусственным источником освещения. При появлении в лунке крупных хлопьев реакцию считают положительной (4 +, 3 +), средних и мелких - как слабоположительные (2 +, 1 +). При отрицательном результате преципитат не образуется.Микрореакцию преципитации можно проводить и количественным методом для установления титра преципитирующих антител и оценки на этой основе эффективности лечения. Более высокие титры МРП получают с плазмой, чем с сывороткой. За рубежом аналогом МРП с сывороткой больного является VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а с плазмой - RPR (Rapid plasma reagin).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

К группе специфических реакций, которые широко употребляются для серологической диагностики сифилиса, относится непрямая реакция иммунофлюоресценции. Как антиген, в ней используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из паренхимы яичек кролика на 7-й день после заражения. Реакцию ставят в двух модификациях: РИФ-АБС и РИФ-200. В первом варианте используют сорбент антител (соникат) - ультраозвучений трепонемный антиген для РСК. Его выпускает Каунасское предприятие по производству бактерийных препаратов (Литва). При варианте РИФ-200 сыворотку больного разводят в 200 раз с целью снять влияние групповых протитрепонемних антител.Постановку РИФ-АБС проводят на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах. На обратной стороне стекол стеклорезом обозначены 10 кружочков диаметром 0,7 см. В рамках кружка на стекло наносят антиген - взвесь бледных трепонем - в таком количестве, чтобы в поле зрения их было 50-60. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем и 10 мин в ацетоне. В отдельную пробирку вносят 0,2 мл сорбента (соникату) и 0,5 мл сыворотки крови больного, хорошо перемешивают. Смесь наносят на мазок (антиген) так, чтобы равномерно его покрыть, выдерживают 30 мин во влажной камере при 3 7 ° С (II фаза реакции). После этого мазок промывают фосфатным буфером, высушивают и наносят на него антишобулинову флуоресцентных сыворотку на 30 мин, ставят во влажную камеру при 37 ° С (II фаза). Препарат вновь промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом.При положительной реакции бледные трепонемы излучают золотисто-зеленый свет, при отрицательной - не светятся.Техника постановки РИФ-200 такое же, как и РИФ-АБС, только сыворотку крови больного предварительно разводят в 200 раз фосфатным буфером. При проведенииреакции иммунофлюоресценции со спинномозговой жидкостью больного сифилисом нервной системы используют РИФ-ц и РИФ-10, т.е. ликвор вводят в реакцию неинактивованим и разведенным, или разведенным 1:10.

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT)

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT) основан на феномене потери их подвижности в присутствии иммобилизирующие протитрепонемних антител сыворотки больного и комплемента в условиях анаэробиоза. Как антиген в реакции используют взвесь бледных трепонем из тестикулярной ткани кролика, зараженного лабораторным штаммом Никольса. Взвесь разводят стерильным 0,85% раствором хлорида натрия так, чтобы в поле зрения было 10-15 спирохет.Для проведения реакции в стерильной пробирке смешивают 0,05 мл сыворотки крови больного, 0,35 мл антигена и 0,15 мл комплемента. Опыт сопровождают контролями сыворотки, антигена и комплемента. Пробирки помещают в анаеростат, создают анаробни условия и выдерживают в термостате 18-20 ч при температуре 35 ° С. Затем из каждой пробирки готовят препарат надавленные капли, подсчитывают не менее 25 трепонем и отмечают, сколько из них подвижных и сколько неподвижных. Процент специфической иммобилизации бледных трепонем подсчитывают по формуле: х = (А-В) / В * 100, где X - процент иммобилизации, А - число подвижных трепонем в контрольной пробирке, В - число подвижных трепонем в опытной пробирке. Реакция считается положительной, когда процент иммобилизации составляет 50 и более, слабоположительный - от 30 до 50, сомнительной - от 20 до 30 и отрицательной - от 0 до 20.В практических лабораториях используют более простой меланжерний метод PIT за М.М. Овчинниковым. Анаэробные условия опыта создаются помещением реагирующей смеси (сыворотки, антиген, комплемент) в меланжеры, оба конца которого закрывают резиновым кольцом. Меланжерна методика позволяет обойтись без сложного оборудования и аппаратуры для создания анаэробиоза, но дает такие результаты, которые не посту паються классической микроанаеростатний методике.Реакции иммобилизации трепонем и иммунофлуоресценции считают наиболее специфичными в серологической диагностике сифилиса. И все же, PIT, несмотря на ее специфичность, не рекомендуют для использования в широкой практике из-за трудоемкости постановки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят как с кадриолипиновим антигеном (неспецифическая, отборочная реакция), так и трепонемным (специфическая реакция), которая подтверждает диагноз сифилиса.Принцип непрямого метода ИФА заключается в том, что в антигена, адсорбированного на твердой фазе в лунках планшета вносят исследуемую сыворотку. Если она содержит антитела против трепонем, образуется комплекс антиген-антитело (II фаза). После отмывания несвязанных неспецифических антител в лунки вносят антиглобулинову сыворотку, конъюгированные с ферментом (чаще всего с пероксидазой хрена). Конъюгат прочно присоединяется к комплексу антиген-антитело (II фаза).После отмывания несвязанного конъюгата в лунки добавляют окрашивающий субстрат ОФД - ортофенилендиамин (III фаза). Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя серную кислоту. Для контроля ставят такие же пробы с положительным и заведомо отрицательной сыворотками.Учет результатов анализа проводят с помощью фотометра, который определяет оптическую плотность в двухволновом режиме (492 нм и 620 нм). Для постановки реакции ензиммичених антител, кроме фотометра, нужны одно-и восьмиканальные автоматические пипетки с полипропиленовым наконечником и соответствующие наборы диагностических тест-систем.Метод ИФА находит широкое применение в серологической диагностике сифилиса. Он одинаково эффективен для выявления болезни в инкубационном периоде (через 1-2 недели после инфицирования), при клинических проявлениях болезни и скрытых его формах. Очень часто ИФА используют при скрининговых обследованиях населения, особенно на станциях переливания крови.В лабораторной практике иногда применяют также реакцию иммунной прилипания (РИП) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Первая из них основывается на том, что патогенные тестикулярные трепонемы штамма Никольса при смешивании с сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов человека прилипают к поверхности красных кровяных телец. РНГА достаточно широко используется для диагностики сифилиса благодаря своей методической простоте. Она становится положительной уже через три недели после заражения. Положительный результат реакции остается годами после выздоровления. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).